| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 英文缩略词 | 第10-11页 |
| 1． 前言 | 第11-20页 |
| 1．1 化学农药、环境与健康 | 第11-13页 |
| 1．2 农药的生物降解 | 第13-15页 |
| 1．3 蚊虫抗药性酯酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1．4 固定化微生物降解农药污染 | 第16-17页 |
| 1．5 融合表达的特点 | 第17-19页 |
| 1．6 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2． 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2．1 材料 | 第20-21页 |
| 2．1．1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2．1．2 主要药品试剂 | 第20页 |
| 2．1．3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2．2 实验方法 | 第21-33页 |
| 2．2．1 工程菌构建 | 第21-25页 |
| 2．2．1．1 菌种的保藏 | 第21页 |
| 2．2．1．2 碱法小量提取质粒DNA | 第21-22页 |
| 2．2．1．3 内切酶对DNA的消化及电泳鉴定 | 第22页 |
| 2．2．1．4 低熔点胶回收目的片段及载体DNA | 第22-23页 |
| 2．2．1．5 线性载体脱磷 | 第23页 |
| 2．2．1．6 体外连接 | 第23-24页 |
| 2．2．1．7 感受态细胞制备 | 第24页 |
| 2．2．1．8 细菌转化 | 第24页 |
| 2．2．1．9 酶切法鉴定阳性克隆 | 第24-25页 |
| 2．2．1．10 连接产物的方向鉴定 | 第25页 |
| 2．2．2 融合表达条件优化 | 第25-28页 |
| 2．2．2．1 工程菌的诱导表达 | 第25页 |
| 2．2．2．2 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测TrxA-EstB1融合蛋白 | 第25-27页 |
| 2．2．2．3 工程菌最佳表达时间分析 | 第27页 |
| 2．2．2．4 薄层扫描测定融合蛋白表达量 | 第27页 |
| 2．2．2．5 TrxA-EstB1融合蛋白表达形式分析 | 第27页 |
| 2．2．2．6 诱导温度对融合蛋白可溶性表达的影响 | 第27-28页 |
| 2．2．2．7 IPTG浓度对目标蛋白表达量的影响 | 第28页 |
| 2．2．3 工程菌表达产物的活性测定 | 第28-30页 |
| 2．2．3．1 工程菌的酯酶活性检测方法 | 第28页 |
| 2．2．3．2 工程菌浓度对解毒能力的影响 | 第28-29页 |
| 2．2．3．3 反应时间对解毒能力的影响 | 第29页 |
| 2．2．3．4 工程菌固定化及其酶活分析 | 第29-30页 |
| 2．2．3．5 诱导表达过程中工程菌生物量的测定 | 第30页 |
| 2．2．4 TrxA-EstB1融合蛋白的分离纯化 | 第30-32页 |
| 2．2．4．1 硫酸铵分级盐析条件确定 | 第30页 |
| 2．2．4．2 DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析 | 第30-31页 |
| 2．2．4．3 样品的浓缩 | 第31页 |
| 2．2．4．4 SephadexG-150分子筛层析 | 第31-32页 |
| 2．2．4．5 蛋白质纯度鉴定 | 第32页 |
| 2．2．5 TrxA-EstB1融合蛋白酶学性质研究 | 第32-33页 |
| 2．2．5．1 pH对TrxA-EstB1融合蛋白的酯酶活性影响 | 第32页 |
| 2．2．5．2 温度对TrxA-EstB1融合蛋白的酯酶活性影响 | 第32页 |
| 2．2．5．3 热稳定性试验 | 第32-33页 |
| 3． 结果与分析 | 第33-54页 |
| 3．1 工程菌的构建 | 第33-38页 |
| 3．2． 融合表达条件的优化 | 第38-43页 |
| 3．2．1 工程菌的诱导表达及检测 | 第38-39页 |
| 3．2．2 目的蛋白分子量测定 | 第39-40页 |
| 3．2．3 工程菌最佳表达时间分析 | 第40-41页 |
| 3．2．4 薄层扫描测定目的蛋白表达量 | 第41页 |
| 3．2．5 目的蛋白表达形式分析 | 第41-42页 |
| 3．2．6 诱导温度对TrxA-EstB1融合蛋白可溶性表达的影响 | 第42-43页 |
| 3．2．7 IPTG浓度对目标蛋白表达的影响 | 第43页 |
| 3．3 工程菌表达产物的活性分析 | 第43-47页 |
| 3．3．1 工程菌的酯酶活性检测 | 第43-44页 |
| 3．3．2 反应时间对解毒能力的影响 | 第44-45页 |
| 3．3．3 工程菌固定化及其酶活分析 | 第45-46页 |
| 3．3．3．1 工程菌固定化的目的及其固定化 | 第45页 |
| 3．3．3．2 固定化工程菌解毒能力分析 | 第45-46页 |
| 3．3．4 诱导表达过程中工程菌生物量的测定 | 第46-47页 |
| 3．4 TrxA-EstB1融合蛋白的分离纯化 | 第47-51页 |
| 3．4．1 硫酸铵分级盐析条件确定 | 第47-48页 |
| 3．4．2 DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析 | 第48-50页 |
| 3．4．3 SephadexG-150分子筛层析 | 第50页 |
| 3．4．4 蛋白质纯度鉴定 | 第50-51页 |
| 3．5 TrxA-EstB1融合蛋白酶学性质研究 | 第51-54页 |
| 3．5．1 pH对TrxA-EstB1融合蛋白的酯酶活性影响 | 第51-52页 |
| 3．5．2 温度对TrxA-EstB1融合蛋白的酯酶活性影响 | 第52-53页 |
| 3．5．3 热稳定性试验 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| 4．1 融合表达质粒pThioHisA-B1的构建 | 第54-55页 |
| 4．1．1 融合表达载体的选用 | 第54-55页 |
| 4．1．2 构建融合表达载体的注意事项 | 第55页 |
| 4．2 融合表达条件的优化 | 第55-56页 |
| 4．3 样品提取液的选择 | 第56-57页 |
| 4．4 pThioHisA-B1的细胞固定化 | 第57页 |
| 4．5 TrxA-EstB1融合蛋白的分离纯化 | 第57-58页 |
| 4．6 TrxA-EstB1融合蛋白的酶学特性 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
