| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1.前言 | 第13-26页 |
| ·蛋白质入核机制的研究 | 第13-16页 |
| ·大分子物质核质转运及的本过程 | 第13-14页 |
| ·importin13的结构与功能的介绍能 | 第14-16页 |
| ·Arx的研究进展 | 第16-25页 |
| ·ARX基因和Arx蛋白 | 第16-19页 |
| ·ARX基因的发现 | 第16页 |
| ·ARX基因 | 第16-17页 |
| ·ARX基因的表达方式 | 第17-18页 |
| ·Arx蛋白结构 | 第18-19页 |
| ·Arx蛋白的生物学功能 | 第19-25页 |
| ·ARX在脑发育中的作用 | 第19-22页 |
| ·ARX在细胞增殖中的作用 | 第20页 |
| ·ARX在区域化中的作用 | 第20-21页 |
| ·ARX在正切方向神经迁移中的作用 | 第21页 |
| ·ARX在辐射迁移中的作用 | 第21-22页 |
| ·ARX在细胞分化中的作用 | 第22-23页 |
| ·ARX在胰腺发育中的作用 | 第23-25页 |
| ·研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2.实验材料和实验方法 | 第26-48页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·抗体列表 | 第26页 |
| ·细胞列表 | 第26页 |
| ·药品和试剂列表 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-48页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第27-31页 |
| ·醋酸锂法转化DNA入酵母 | 第27-28页 |
| ·酵母样品收集 | 第28页 |
| ·酵母培养基配制 | 第28-29页 |
| ·酵母双杂交 | 第29-31页 |
| ·SD选择性培养基中3-AT浓度的确定: | 第29页 |
| ·酵母菌株贮存和复苏 | 第29页 |
| ·酵母双杂交步骤 | 第29-30页 |
| ·β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性的检测 | 第30-31页 |
| ·从酵母菌中提取质粒 | 第31页 |
| ·质粒提取和转化 | 第31-35页 |
| ·质粒试剂配制 | 第31-32页 |
| ·SDS碱裂解小量制备质粒法 | 第32-33页 |
| ·大规模质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·DNA转化 | 第35页 |
| ·质粒构建实验 | 第35-36页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第35页 |
| ·pGEX-4T-2-F-Arx和PET-28(a+)-F-Arx的构建 | 第35-36页 |
| ·生化实验 | 第36-42页 |
| ·Western Blot(免疫印迹分析) | 第36-38页 |
| ·蛋白质的表达和纯化 | 第38-40页 |
| ·目的蛋白的大量表达 | 第38-39页 |
| ·Arx-GST蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·Beads的回收 | 第40页 |
| ·蛋白质浓度测定方法 | 第40-41页 |
| ·抗体的制备 | 第41页 |
| ·血清中ARX抗体的纯化 | 第41-42页 |
| ·细胞相关实验 | 第42-46页 |
| ·细胞培养有关试剂的配制 | 第42-43页 |
| ·胞培养基本操作流程 | 第43-46页 |
| ·换液 | 第43页 |
| ·传代 | 第43-44页 |
| ·细胞计数 | 第44页 |
| ·接种细胞 | 第44页 |
| ·瞬时转染 | 第44-45页 |
| ·裂解细胞 | 第45-46页 |
| ·GST-pull down | 第46页 |
| ·免疫共沉淀 | 第46-48页 |
| 3.实验结果 | 第48-63页 |
| ·酵母双杂交 | 第48-55页 |
| ·酵母双杂交分析 | 第48-55页 |
| ·pGBKT7-BD-C-imp13的构建 | 第49页 |
| ·pGBKT7-C-imp13-AH109的表达 | 第49-50页 |
| ·生长曲线测定pGBKT7-C-IPO13的毒性 | 第50页 |
| ·自激活测试 | 第50-51页 |
| ·筛选人胚脑cDNA文库 | 第51-55页 |
| ·体内体外实验进一步验证相互作用 | 第55-58页 |
| ·免疫共沉淀验证相互作用 | 第55-56页 |
| ·GST-Pull down进一步验证相互作用 | 第56-58页 |
| ·ARX抗体制备及纯化 | 第58-63页 |
| ·构建获得重组质粒pGEX4T2-F-Arx,pET28(a+)—F-ARX | 第58-61页 |
| ·F-Arx DNA片段的扩增 | 第58-59页 |
| ·构建获得重组质粒pGEX4T2-F-Arx,pET28(a+)—F-ARX | 第59页 |
| ·表达和纯化pGEX4T2-F-Arx,表达pET28(a+)—F-ARX | 第59-61页 |
| ·抗血清的纯化 | 第61-63页 |
| 4.讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附件:在校期间的研究成果 | 第70页 |
