摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-8页 |
第一章 前言 | 第8-17页 |
·麻黄碱概述 | 第8-9页 |
·麻黄碱简介 | 第8页 |
·麻黄碱作用 | 第8-9页 |
·麻黄碱的生产 | 第9-11页 |
·植物提取法 | 第9页 |
·化学合成法 | 第9-10页 |
·植物细胞组织培养麻黄碱 | 第10页 |
·半生物转化法生产麻黄碱 | 第10-11页 |
·手性化合物简介及研究现状 | 第11-12页 |
·手性化合物简介 | 第11页 |
·手性化合物研究现状 | 第11-12页 |
·手性化合物制备方法 | 第12-13页 |
·物理法 | 第12页 |
·化学法 | 第12-13页 |
·生物合成与转化 | 第13页 |
·生物催化 | 第13-14页 |
·生物催化羰基还原反应原理 | 第13-14页 |
·与化学方法的比较 | 第14页 |
·纯化酶与全细胞生物催化的比较 | 第14页 |
·羰基不对称还原酶的应用 | 第14-15页 |
·研究意义 | 第15-16页 |
·研究内容 | 第16-17页 |
第二章 羰基不对称还原酶基因的克隆与表达 | 第17-30页 |
·材料与方法 | 第17-23页 |
·菌株和质粒 | 第17页 |
·培养基 | 第17页 |
·主要生化和分子生物学试剂 | 第17-18页 |
·主要仪器和设备 | 第18页 |
·引物设计 | 第18页 |
·质粒的大量提取 | 第18页 |
·PCR 反应 | 第18-19页 |
·PCR 产物的纯化 | 第19页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
·大肠杆菌E.coli JM109 感受态的制备及简易转化程序 | 第19-20页 |
·常规基因克隆操作方法 | 第20页 |
·重组表达载体pKK223-mldh 的构建 | 第20-21页 |
·蛋白质含量的测定 | 第21-22页 |
·细胞裂解液的制备 | 第22页 |
·酶活测定方法 | 第22页 |
·重组质粒pKK223-mldh 表达产物的鉴定 | 第22-23页 |
·重组菌生长曲线的测定 | 第23页 |
·重组质粒pKK223-mldh 稳定性分析 | 第23页 |
·IPTG 诱导条件的研究 | 第23页 |
·结果与分析 | 第23-29页 |
·目的基因mldh 的扩增 | 第23-24页 |
·重组质粒pKK223-mldh 的构建 | 第24-25页 |
·重组质粒稳定性分析 | 第25-26页 |
·重组菌表达产物的鉴定 | 第26页 |
·重组菌生长曲线的测定 | 第26-27页 |
·重组菌IPTG 诱导条件的研究 | 第27-28页 |
·SDS-PAGE 蛋白电泳分析 | 第28-29页 |
·本章小结 | 第29-30页 |
第三章 葡萄糖脱氢酶的克隆与表达 | 第30-40页 |
·材料和方法 | 第30-35页 |
·菌株和质粒 | 第30页 |
·培养基 | 第30-31页 |
·主要生化和分子生物学试剂 | 第31页 |
·主要仪器和设备 | 第31页 |
·引物设计 | 第31页 |
·枯草芽孢杆菌总DNA 的提取 | 第31页 |
·PCR 反应 | 第31-32页 |
·PCR 产物纯化 | 第32页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
·重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
·蛋白含量测定 | 第33页 |
·细胞裂解液的制备 | 第33页 |
·酶活测定方法 | 第33-34页 |
·生长曲线的测定 | 第34页 |
·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第34页 |
·重组质粒pET28a-gdh 稳定性分析 | 第34-35页 |
·重组菌E.coli BL21(pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用 | 第35页 |
·结果与分析 | 第35-39页 |
·目的基因gdh 的扩增 | 第35页 |
·重组质粒pET28a-gdh 的构建 | 第35-36页 |
·重组质粒稳定性分析 | 第36页 |
·重组菌生长曲线的测定 | 第36-37页 |
·葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第37页 |
·SDS-PAGE 蛋白电泳分析 | 第37-38页 |
·重组菌E.coli BL21 (pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用 | 第38-39页 |
·本章小结 | 第39-40页 |
第四章 共表达重组大肠杆菌产麻黄碱的研究 | 第40-47页 |
·材料和方法 | 第40-41页 |
·菌株和质粒 | 第40页 |
·培养基 | 第40页 |
·主要生化和分子生物学试剂 | 第40页 |
·主要仪器和设备 | 第40页 |
·重组大肠杆菌E.coli JM109 (pKK223-mldh,pET28a-gdh)和E.coli BL21(pKK223-mldh,pET28a-gdh)的构建 | 第40页 |
·重组菌生长曲线的测定 | 第40-41页 |
·培养时间对质粒共存的影响 | 第41页 |
·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响 | 第41页 |
·羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第41页 |
·结果与分析 | 第41-45页 |
·共表达重组大肠杆菌的构建 | 第41-42页 |
·培养时间对质粒共存的影响 | 第42-43页 |
·重组菌生长曲线测定 | 第43页 |
·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响 | 第43-45页 |
·重组大肠杆菌在生物催化产l-麻黄碱中的应用 | 第45页 |
·讨论 | 第45-47页 |
主要结论和展望 | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-53页 |
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |