| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-17页 |
| ·麻黄碱概述 | 第8-9页 |
| ·麻黄碱简介 | 第8页 |
| ·麻黄碱作用 | 第8-9页 |
| ·麻黄碱的生产 | 第9-11页 |
| ·植物提取法 | 第9页 |
| ·化学合成法 | 第9-10页 |
| ·植物细胞组织培养麻黄碱 | 第10页 |
| ·半生物转化法生产麻黄碱 | 第10-11页 |
| ·手性化合物简介及研究现状 | 第11-12页 |
| ·手性化合物简介 | 第11页 |
| ·手性化合物研究现状 | 第11-12页 |
| ·手性化合物制备方法 | 第12-13页 |
| ·物理法 | 第12页 |
| ·化学法 | 第12-13页 |
| ·生物合成与转化 | 第13页 |
| ·生物催化 | 第13-14页 |
| ·生物催化羰基还原反应原理 | 第13-14页 |
| ·与化学方法的比较 | 第14页 |
| ·纯化酶与全细胞生物催化的比较 | 第14页 |
| ·羰基不对称还原酶的应用 | 第14-15页 |
| ·研究意义 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 羰基不对称还原酶基因的克隆与表达 | 第17-30页 |
| ·材料与方法 | 第17-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器和设备 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·质粒的大量提取 | 第18页 |
| ·PCR 反应 | 第18-19页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第19页 |
| ·大肠杆菌E.coli JM109 感受态的制备及简易转化程序 | 第19-20页 |
| ·常规基因克隆操作方法 | 第20页 |
| ·重组表达载体pKK223-mldh 的构建 | 第20-21页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第21-22页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第22页 |
| ·酶活测定方法 | 第22页 |
| ·重组质粒pKK223-mldh 表达产物的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第23页 |
| ·重组质粒pKK223-mldh 稳定性分析 | 第23页 |
| ·IPTG 诱导条件的研究 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-29页 |
| ·目的基因mldh 的扩增 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pKK223-mldh 的构建 | 第24-25页 |
| ·重组质粒稳定性分析 | 第25-26页 |
| ·重组菌表达产物的鉴定 | 第26页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| ·重组菌IPTG 诱导条件的研究 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳分析 | 第28-29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 葡萄糖脱氢酶的克隆与表达 | 第30-40页 |
| ·材料和方法 | 第30-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器和设备 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·枯草芽孢杆菌总DNA 的提取 | 第31页 |
| ·PCR 反应 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·蛋白含量测定 | 第33页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第33页 |
| ·酶活测定方法 | 第33-34页 |
| ·生长曲线的测定 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第34页 |
| ·重组质粒pET28a-gdh 稳定性分析 | 第34-35页 |
| ·重组菌E.coli BL21(pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·目的基因gdh 的扩增 | 第35页 |
| ·重组质粒pET28a-gdh 的构建 | 第35-36页 |
| ·重组质粒稳定性分析 | 第36页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第36-37页 |
| ·葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳分析 | 第37-38页 |
| ·重组菌E.coli BL21 (pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 共表达重组大肠杆菌产麻黄碱的研究 | 第40-47页 |
| ·材料和方法 | 第40-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器和设备 | 第40页 |
| ·重组大肠杆菌E.coli JM109 (pKK223-mldh，pET28a-gdh)和E.coli BL21(pKK223-mldh，pET28a-gdh)的构建 | 第40页 |
| ·重组菌生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| ·培养时间对质粒共存的影响 | 第41页 |
| ·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响 | 第41页 |
| ·羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·共表达重组大肠杆菌的构建 | 第41-42页 |
| ·培养时间对质粒共存的影响 | 第42-43页 |
| ·重组菌生长曲线测定 | 第43页 |
| ·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响 | 第43-45页 |
| ·重组大肠杆菌在生物催化产l-麻黄碱中的应用 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 主要结论和展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
