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不对称还原产l-麻黄碱重组大肠杆菌的构建

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 前言第8-17页
   ·麻黄碱概述第8-9页
     ·麻黄碱简介第8页
     ·麻黄碱作用第8-9页
   ·麻黄碱的生产第9-11页
     ·植物提取法第9页
     ·化学合成法第9-10页
     ·植物细胞组织培养麻黄碱第10页
     ·半生物转化法生产麻黄碱第10-11页
   ·手性化合物简介及研究现状第11-12页
     ·手性化合物简介第11页
     ·手性化合物研究现状第11-12页
   ·手性化合物制备方法第12-13页
     ·物理法第12页
     ·化学法第12-13页
     ·生物合成与转化第13页
   ·生物催化第13-14页
     ·生物催化羰基还原反应原理第13-14页
     ·与化学方法的比较第14页
     ·纯化酶与全细胞生物催化的比较第14页
   ·羰基不对称还原酶的应用第14-15页
   ·研究意义第15-16页
   ·研究内容第16-17页
第二章 羰基不对称还原酶基因的克隆与表达第17-30页
   ·材料与方法第17-23页
     ·菌株和质粒第17页
     ·培养基第17页
     ·主要生化和分子生物学试剂第17-18页
     ·主要仪器和设备第18页
     ·引物设计第18页
     ·质粒的大量提取第18页
     ·PCR 反应第18-19页
     ·PCR 产物的纯化第19页
     ·琼脂糖凝胶电泳第19页
     ·大肠杆菌E.coli JM109 感受态的制备及简易转化程序第19-20页
     ·常规基因克隆操作方法第20页
     ·重组表达载体pKK223-mldh 的构建第20-21页
     ·蛋白质含量的测定第21-22页
     ·细胞裂解液的制备第22页
     ·酶活测定方法第22页
     ·重组质粒pKK223-mldh 表达产物的鉴定第22-23页
     ·重组菌生长曲线的测定第23页
     ·重组质粒pKK223-mldh 稳定性分析第23页
     ·IPTG 诱导条件的研究第23页
   ·结果与分析第23-29页
     ·目的基因mldh 的扩增第23-24页
     ·重组质粒pKK223-mldh 的构建第24-25页
     ·重组质粒稳定性分析第25-26页
     ·重组菌表达产物的鉴定第26页
     ·重组菌生长曲线的测定第26-27页
     ·重组菌IPTG 诱导条件的研究第27-28页
     ·SDS-PAGE 蛋白电泳分析第28-29页
   ·本章小结第29-30页
第三章 葡萄糖脱氢酶的克隆与表达第30-40页
   ·材料和方法第30-35页
     ·菌株和质粒第30页
     ·培养基第30-31页
     ·主要生化和分子生物学试剂第31页
     ·主要仪器和设备第31页
     ·引物设计第31页
     ·枯草芽孢杆菌总DNA 的提取第31页
     ·PCR 反应第31-32页
     ·PCR 产物纯化第32页
     ·琼脂糖凝胶电泳第32页
     ·重组表达载体的构建第32-33页
     ·蛋白含量测定第33页
     ·细胞裂解液的制备第33页
     ·酶活测定方法第33-34页
     ·生长曲线的测定第34页
     ·SDS-PAGE 蛋白电泳第34页
     ·重组质粒pET28a-gdh 稳定性分析第34-35页
     ·重组菌E.coli BL21(pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用第35页
   ·结果与分析第35-39页
     ·目的基因gdh 的扩增第35页
     ·重组质粒pET28a-gdh 的构建第35-36页
     ·重组质粒稳定性分析第36页
     ·重组菌生长曲线的测定第36-37页
     ·葡萄糖脱氢酶酶活测定第37页
     ·SDS-PAGE 蛋白电泳分析第37-38页
     ·重组菌E.coli BL21 (pET28a-gdh)在生物催化不对称反应中的应用第38-39页
   ·本章小结第39-40页
第四章 共表达重组大肠杆菌产麻黄碱的研究第40-47页
   ·材料和方法第40-41页
     ·菌株和质粒第40页
     ·培养基第40页
     ·主要生化和分子生物学试剂第40页
     ·主要仪器和设备第40页
     ·重组大肠杆菌E.coli JM109 (pKK223-mldh,pET28a-gdh)和E.coli BL21(pKK223-mldh,pET28a-gdh)的构建第40页
     ·重组菌生长曲线的测定第40-41页
     ·培养时间对质粒共存的影响第41页
     ·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响第41页
     ·羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶酶活测定第41页
   ·结果与分析第41-45页
     ·共表达重组大肠杆菌的构建第41-42页
     ·培养时间对质粒共存的影响第42-43页
     ·重组菌生长曲线测定第43页
     ·辅酶对重组菌不对称还原反应的影响第43-45页
     ·重组大肠杆菌在生物催化产l-麻黄碱中的应用第45页
   ·讨论第45-47页
主要结论和展望第47-48页
致谢第48-49页
参考文献第49-53页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第53页

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