| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 材料与方法 | 第12-23页 |
| ·材料 | 第12-16页 |
| ·菌株 | 第12页 |
| ·载体 | 第12页 |
| ·培养基 | 第12页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第12-15页 |
| ·分子克隆工具酶及重要生化试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-23页 |
| ·细菌总DNA 的分离提取 | 第16页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·质粒DNA 的小量提取 | 第16页 |
| ·质粒DNA 的大量提取 | 第16-17页 |
| ·海因氧化酶基因片段的扩增 | 第17页 |
| ·目的片段的回收及纯化 | 第17-18页 |
| ·采用滤纸-EP 管高速离心法 | 第17-18页 |
| ·玻璃珠法纯化DNA | 第18页 |
| ·试剂盒回收目的片段 | 第18页 |
| ·酶切反应 | 第18-19页 |
| ·酶切检测PCR 扩增产物 | 第18页 |
| ·目的片断及质粒载体(pUC19)酶切 | 第18-19页 |
| ·DNA 凝胶电泳 | 第19页 |
| ·载体与目的片段连接 | 第19页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第19-20页 |
| ·CaCl_2 转化法 | 第19-20页 |
| ·高频转化法 | 第20页 |
| ·筛选重组子 | 第20-21页 |
| ·快速细胞破碎法 | 第20页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·海因氧化酶基因序列测定、同源性比较 | 第21页 |
| ·海因氧化酶基因的诱导表达 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第21-22页 |
| ·海因氧化酶基因的分析及功能预测 | 第22-23页 |
| 2 结果 | 第23-45页 |
| ·海因氧化酶基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·目的片段的回收及载体、目的片段的限制性酶切 | 第24页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第24-45页 |
| ·重组质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·质粒pUC19 为克隆载体 | 第24-25页 |
| ·pGM-T 为克隆载体 | 第25页 |
| ·重组质粒对大肠杆菌JM109 的转化 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌JM109 和所用载体的抗生素耐受性实验 | 第25-26页 |
| ·重组质粒对大肠杆菌JM109 的转化 | 第26页 |
| ·克隆基因的鉴定 | 第26-39页 |
| ·重组质粒的快速提取和电泳结果比较 | 第26-27页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第27-30页 |
| ·Hyu_O 核苷酸序列的同源性比较分析 | 第30-34页 |
| ·Hyu_O 氨基酸序列分析 | 第34-39页 |
| ·海因氧化酶基因(Hyu_O)表达的SDS-PAGE 检测 | 第39页 |
| ·海因氧化酶基因(Hyu_O)的分析及功能预测结果 | 第39-45页 |
| ·Hyu_O 氨基酸序列疏水性预测 | 第39-40页 |
| ·Hyu_O 氨基酸序列跨膜螺旋预测 | 第40-41页 |
| ·Hyu_O 氨基酸序列卷曲螺旋的预测 | 第41-42页 |
| ·Hyu_O 信号肽预测 | 第42-43页 |
| ·Hyu_O 二级结构的预测结果 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-49页 |
| ·PCR 反应条件的筛选，优化 | 第45页 |
| ·重组质粒的构建和克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组菌株在大肠杆菌JM109 中的表达 | 第47页 |
| ·利用生物信息学对海因氧化酶基本性质的预测 | 第47-49页 |
| 小结 | 第49-50页 |
| 文献综述 海因酶研究进展 | 第50-70页 |
| 1 海因酶的历史 | 第50-52页 |
| 2 海因酶的分布 | 第52页 |
| 3 海因酶的分类 | 第52-59页 |
| ·根据海因酶转化产物光学活性的不同进行分类 | 第52-55页 |
| ·D-海因水解酶 | 第53-54页 |
| ·L-海因水解酶 | 第54-55页 |
| ·DL-海因水解酶 | 第55页 |
| ·根据其作用底物的不同分类 | 第55-59页 |
| ·海因水解酶 | 第55-57页 |
| ·二氢嘧啶酶 | 第55-56页 |
| ·尿囊素酶 | 第56-57页 |
| ·酰亚胺酶 | 第57页 |
| ·羧甲基海因酶 | 第57页 |
| ·与N-氨甲酰氨基酸水解有关的酶 | 第57-59页 |
| ·D-氨甲酰化酶 | 第57-58页 |
| ·L-氨甲酰化酶 | 第58页 |
| ·其他N-氨甲酰氨基酸的酰胺水解酶 | 第58-59页 |
| ·海因消旋酶 | 第59页 |
| 4 海因酶的性质 | 第59-65页 |
| ·酶的底物选择性 | 第59-60页 |
| ·酶的立体选择性 | 第60-62页 |
| ·酶的诱导性 | 第62-63页 |
| ·酶的热稳定性 | 第63-64页 |
| ·辅助因子和亚基组成 | 第64-65页 |
| 5 海因酶基因的分离和克隆表达 | 第65-68页 |
| ·D-和L-海因酶基因的分离及表达 | 第65-67页 |
| ·大肠杆菌中海因酶基因的分离及表达 | 第67-68页 |
| 6 海因酶在氨基酸生产中的应用 | 第68-69页 |
| 7 海因酶研究的前景展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 在校期间科研成果 | 第81页 |
