| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-43页 |
| ·多聚谷氨酰胺疾病和脊髓小脑共济失调三型(SCA3) | 第13-15页 |
| ·多聚谷氨酰胺疾病简介 | 第13-14页 |
| ·脊髓小脑共济失调三型(SCA3) | 第14-15页 |
| ·神经退行性疾病中的蛋白聚集 | 第15页 |
| ·泛素蛋白酶体系统 | 第15-21页 |
| ·泛素和蛋白酶体简介 | 第16-19页 |
| ·泛素蛋白酶体在神经退行性疾病中的作用 | 第19-21页 |
| ·MJD1基因和ataxin-3蛋白 | 第21-28页 |
| ·C端CAG重复序列 | 第22-23页 |
| ·UIM domain | 第23页 |
| ·N端的Josephin结构域 | 第23-24页 |
| ·核定位序列 | 第24-25页 |
| ·多聚谷氨酰胺周围的序列 | 第25页 |
| ·Ataxin-3的去泛素化功能 | 第25-26页 |
| ·Ataxin-3的其它调控功能 | 第26-28页 |
| ·对SCA3发病的重要通路 | 第28-29页 |
| ·Caspase切割与凋亡对SCA3的作用 | 第28页 |
| ·Ataxin-3是自噬的底物 | 第28页 |
| ·蛋白酶体与ataxin-3的关系 | 第28-29页 |
| ·多聚谷氨酰胺疾病的治疗展望 | 第29-30页 |
| ·蛋白酶体上具有ATP酶活性蛋白介导底物降解 | 第30-32页 |
| ·参考文献 | 第32-43页 |
| 第二章 材料与方法 | 第43-65页 |
| ·细胞Toatl RNA的提取及逆转录cDNA | 第43页 |
| ·聚合酶链式反应(polymerase Chain Reaetion,PCR) | 第43-44页 |
| ·DNA样品的琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·从琼脂糖凝胶上回收DNA片段(taKaRa Agrose Gel DNA PuriifcationKit) | 第44-45页 |
| ·质粒DNA或DNA片段的限制内切性酶酶切 | 第45页 |
| ·DNA片段的连接反应(TaKaRa MutanBESTKit) | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA小量抽提 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA大量抽提 | 第48页 |
| ·基于PCR的DNA定点突变(TaKaRa MutanBESTKit) | 第48-49页 |
| ·本论文中所用质粒载体的构建 | 第49-51页 |
| ·大肠杆菌中蛋白质诱导表达 | 第51-52页 |
| ·蛋白质的SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-APGE) | 第52-54页 |
| ·Gst-Tag融合蛋白的小量纯化 | 第54页 |
| ·His-tah融合蛋白的小量纯化 | 第54-55页 |
| ·MBP-tag融合蛋白的小量纯化 | 第55-56页 |
| ·经纯化所得到的蛋白溶液的脱盐与浓缩 | 第56-57页 |
| ·体外降解实验 | 第57页 |
| ·GST Pull-down | 第57页 |
| ·Western Blot | 第57-59页 |
| ·细胞培养 | 第59-60页 |
| ·细胞转染(脂质体转染法) | 第60页 |
| ·稳定表达目的蛋白的细胞株的筛选 | 第60-61页 |
| ·细胞的裂解 | 第61页 |
| ·放线菌酮(CHX)追踪实验 | 第61-62页 |
| ·免疫共沉淀(Co-immunocipitation,Co-IP) | 第62-63页 |
| ·免疫细胞化学染色(以53mm细胞培养皿为例) | 第63-65页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第65-88页 |
| ·p45与多聚谷氨酰胺正常和异常扩增的ataxin-3有体外结合 | 第65-66页 |
| ·p45促进多聚谷氨酰胺正常和异常扩增的ataxin-3的降解 | 第66-70页 |
| ·p45在体外系统中能促进ataxin-3的降解 | 第70-72页 |
| ·免疫共沉淀实验中p45与ataxin-3的结合 | 第72-74页 |
| ·p45特异地调控ataxin-3的降解 | 第74-75页 |
| ·p45的调节作用不完全依赖于ataxin-3的UIM结构域 | 第75-77页 |
| ·Ataxin-3的N端与p45结合并且在p45的调控作用中是必要的 | 第77-79页 |
| ·MSS1,p48,p56等其他19S蛋白酶体上具有ATP酶活性的亚基不能促进ataxin-3的降解 | 第79-80页 |
| ·实验结果讨论 | 第80-83页 |
| ·参考文献 | 第83-86页 |
| ·总结与展望 | 第86-88页 |
| ·总结 | 第86-87页 |
| ·展望 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第90页 |
