| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-23页 |
| 阿尔茨海默病研究进展 | 第10-16页 |
| β淀粉样蛋白学说 | 第10-13页 |
| AD相关基因学说 | 第13-15页 |
| 胆固醇代谢与Aβ蛋白、PS | 第15-16页 |
| microRNA研究进展 | 第16-23页 |
| microRNA与标靶 | 第17-18页 |
| microRNA的预测 | 第18-19页 |
| microRNA与疾病 | 第19-20页 |
| microRNA与神经系统 | 第20-23页 |
| 第一部分 APPswe/PS1ΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型分析 | 第23-36页 |
| (一) 材料 | 第23-25页 |
| 1 实验动物 | 第23页 |
| 2 主要生化试剂 | 第23页 |
| 3 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 4 主要溶液配置 | 第24-25页 |
| (二) 实验方法 | 第25-29页 |
| 1 动物分组及实验设计 | 第25页 |
| 2 转基因阳性鼠的PCR鼠尾鉴定 | 第25-29页 |
| (三) 实验结果 | 第29-34页 |
| (四) 讨论 | 第34-36页 |
| 第二部分 microRNA在阿尔茨海默病中的作用研究 | 第36-83页 |
| (一) 材料 | 第36-40页 |
| 1 实验动物 | 第36页 |
| 2 主要生化试剂 | 第36-37页 |
| 3 主要溶液配置 | 第37-39页 |
| 4 主要仪器设备 | 第39-40页 |
| (二) 实验方法 | 第40-55页 |
| 1 动物分组 | 第40页 |
| 2 microRNA芯片 | 第40-41页 |
| 3 Ambion RNA提取试剂盒提取小鼠组织或细胞富含miRNA的总RNA | 第41-42页 |
| 4 逆转录PCR(RT-PCR) | 第42页 |
| 5 real-time PCR检测APPSWE/PS1ΔE9双转基因AD小鼠模型大脑皮层及海马中microRNA的表达水平变化 | 第42页 |
| 6 has-miR-29C表达质粒的构建 | 第42-44页 |
| 7 质粒转化Top10感受态细胞 | 第44页 |
| 8 转化后菌落的插入片段阳性克隆快速鉴定 | 第44页 |
| 9 质粒DNA的小量提取 | 第44-45页 |
| 10 菌液小提鉴定阳性克隆 | 第45页 |
| 11 SH-SY5Y细胞的Blasticidine药物浓度筛选 | 第45页 |
| 12 has-miR-29C质粒稳定转染SH-SY5Y细胞 | 第45-46页 |
| 13 hAPPcDNA质粒与has-miR-29C质粒共同瞬时转染 | 第46页 |
| 14 hsa miR-29C靶基因的预测 | 第46页 |
| 15 免疫印迹(Western blot) | 第46-47页 |
| 16 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第47-49页 |
| 17 real time PCR检测靶基因mRNA表达水平 | 第49-50页 |
| 18. 构建APP、NAV3 3’UTR荧光素酶报告载体 | 第50-54页 |
| 19. 带有APP、NAV3 mRNA 3’UTR的psiCHECK-2荧光素酶报告基因载体与miR-29c表达载体共转染实验 | 第54-55页 |
| 20. 双荧光素酶报告检测实验 | 第55页 |
| (三)实验结果 | 第55-74页 |
| 1、microRNA芯片检测结果 | 第55-56页 |
| 2、APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠及野生小鼠提取RNA结果 | 第56-57页 |
| 3 real-time PCR结果 | 第57-59页 |
| 4. 质粒转化Top10感受态细胞 | 第59-60页 |
| 5. SH-SY5Y细胞的Blasticidine药物浓度筛选 | 第60页 |
| 6. has miR-29C质粒稳定转染SH-SY5Y细胞 | 第60-61页 |
| 7. has-miR-29c靶基因的预测 | 第61页 |
| 8. Western blot检测预测靶蛋白表达情况 | 第61-63页 |
| 9. real time PCR检测靶基因mRNA表达水平 | 第63-64页 |
| 10. Western blot检测APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠中APP、BACE1、NAV3蛋白预测靶蛋白表达情况 | 第64-66页 |
| 11 hAPPcDNA质粒与has-miR-29c质粒共同瞬时转染 | 第66-67页 |
| 12 hBACE1质粒与has-miR-29C质粒共同瞬时转染 | 第67-68页 |
| 13 hPI15质粒与has-miR-29C质粒共同瞬时转染 | 第68页 |
| 14. 构建了APP、NAV3 mRNA的3’UTR荧光素酶报告载体 | 第68-69页 |
| 15. 构建了APP mRNA的2个突变3’UTR荧光素酶报告载体 | 第69-70页 |
| 16. 带有APP3’UTR的psiCHECK-2荧光素酶报告基因载体与miR-29c表达载体共转染实验 | 第70-71页 |
| 17. APP突变3’UTR的psiCHECK-2荧光素酶报告基因载体与miR-29c表达载体共转染实验 | 第71-73页 |
| 18 带有NAV3 3’UTR的psiCHECK-2荧光素酶报告基因载体与miR-29c表达载体共转染实验 | 第73-74页 |
| (四) 讨论 | 第74-83页 |
| microRNA29c对APP蛋白的表达调控 | 第75-77页 |
| microRNA29c对BACE1蛋白的负性表达调控 | 第77-78页 |
| microRNA29c对NAV3基因的调控 | 第78-79页 |
| microRNA研究技术 | 第79-83页 |
| 第三部分 miRNA29c转基因小鼠的建立和分析 | 第83-88页 |
| (一) 实验方法 | 第83-85页 |
| 1. Has-miR-29c转基因小鼠的制备 | 第83-84页 |
| 2. 转基因阳性鼠基因型的PCR鼠尾鉴定 | 第84-85页 |
| 3. Realtime PCR检测miR-29c转基因阳性小鼠的表达情况 | 第85页 |
| 4. westyon blot检测miR-92c转基因阳性小鼠靶蛋白的表达情况 | 第85页 |
| (二) 结果 | 第85-88页 |
| 1. Has-miR-29c转基因小鼠的制备 | 第85页 |
| 2 PCR鉴定miR-29c转基因阳性小鼠结果 | 第85-86页 |
| 3. Realtime PCR检测miR-29c转基因阳性小鼠的表达情况 | 第86-87页 |
| 4. western blot检测miR-29c转基因阳性小鼠靶蛋白的表达情况 | 第87-88页 |
| 讨论 | 第88-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 附录 | 第107-117页 |
| 英文缩略词表 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
