| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-19页 |
| ·干扰素的研究进展 | 第8-11页 |
| ·干扰素的生物活性 | 第8-9页 |
| ·IFN-γ的研究进展 | 第9-10页 |
| ·干扰素的应用研究 | 第10-11页 |
| ·目的基因转化方法 | 第11-14页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第11-12页 |
| ·基因枪法 | 第12页 |
| ·激光微束穿刺转化法 | 第12-13页 |
| ·其他转化方法 | 第13-14页 |
| ·植物生物反应器 | 第14-18页 |
| ·植物生物反应器的研究进展 | 第14-15页 |
| ·转基因植物作为生物反应器存在问题与解决方法 | 第15-18页 |
| ·目的及意义 | 第18-19页 |
| 实验部分 | 第19-55页 |
| 1. 油菜偏嗜性ChIFN-γ合成及原核表达 | 第19-32页 |
| ·材料与方法 | 第19-20页 |
| ·菌种与质粒 | 第19页 |
| ·工具酶和试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·基因的设计与合成 | 第20-27页 |
| ·基因的设计 | 第20页 |
| ·质粒pBSK-ChIFN-γ的提取 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增目的基因ChIFN-γ | 第21页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第21-22页 |
| ·ChIFN-γ基因的克隆 | 第22-24页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·诱导表达 | 第25-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·基因的设计 | 第27页 |
| ·ChIFN-γ基因的扩增 | 第27-28页 |
| ·ChIFN-γ基因的克隆 | 第28页 |
| ·表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·ChIFN-γ在大肠杆菌中的表达 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 2 植物表达载体pSW-Napin-ChIFN-γ-NOS的构建及遗传转化油菜的研究 | 第32-44页 |
| ·实验材料与试剂 | 第32-35页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·真核表达载体pSW及质粒pBSK-NGN的提取 | 第35页 |
| ·PCR扩增目的基因Napin-ChIFN-γ-NOS | 第35页 |
| ·PCR产物和真核表达载体pSW的酶切及胶回收 | 第35-36页 |
| ·胶回收片段的连接及转化大肠杆菌TG1感受态细胞 | 第36页 |
| ·植物表达载体pSW-Napin-ChIFN-γ-NOS转化农杆菌EHA105 | 第36-37页 |
| ·无菌材料的准备 | 第37页 |
| ·农杆菌介导油菜遗传转化 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-43页 |
| ·表达载体pSW-Napin-ChIFN-γ-NOS的构建 | 第39-42页 |
| ·pSW-Napin-ChIFN-γ-NOS遗传转化油菜 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| 3 抗性植株的分子鉴定 | 第44-55页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| ·植物基因组提取试剂 | 第44页 |
| ·PCR检测试剂 | 第44页 |
| ·Southern blot试剂 | 第44-45页 |
| ·GUS染色试剂 | 第45页 |
| ·转基因植株ChIFN-γ蛋白检测试剂 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·油菜基因组的提取 | 第45-46页 |
| ·抗性植株的PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·油菜基因组的酶切 | 第47-48页 |
| ·Southern blot检测 | 第48-49页 |
| ·GUS活性检测 | 第49页 |
| ·油菜总蛋白的提取 | 第49页 |
| ·ELISA定量检测转基因植株ChIFN-γ蛋白 | 第49页 |
| ·转基因油菜表型观察 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·PCR检测抗性植株 | 第50页 |
| ·转基因油菜基因组的southern杂交检测 | 第50-51页 |
| ·转基因植株的GUS活性检测 | 第51-52页 |
| ·ELISA定量检测转基因植株ChIFN-γ蛋白 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的表型观察 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 缩略词表 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
