猪细小病毒变异株ELISA检测方法的建立及血清流行病学初步调查
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 猪细小病毒(PPV)文献综述 | 第10-30页 |
| 1 猪细小病毒病的流行病学 | 第10-11页 |
| ·历史及分布 | 第10页 |
| ·近年的流行状况 | 第10-11页 |
| ·流行病学 | 第11页 |
| 2 PPV病原学 | 第11-13页 |
| ·PPV的分类地位 | 第11页 |
| ·PPV的毒株分型 | 第11页 |
| ·PPV的形态及理化特性 | 第11-12页 |
| ·PPV的血凝性 | 第12页 |
| ·PPV的细胞培养 | 第12页 |
| ·PPV的组织嗜性与致病性 | 第12-13页 |
| 3 PPV的分子生物学研究进展 | 第13-16页 |
| ·PPV的基因组结构 | 第13页 |
| ·PPV的DNA复制特点 | 第13-14页 |
| ·PPV基因组的转录 | 第14页 |
| ·PPV基因组编码蛋白 | 第14-15页 |
| ·PPV结构蛋白的免疫原性 | 第15页 |
| ·PPV的基因表达调控 | 第15-16页 |
| 4 PPV疫苗的研究进展 | 第16-21页 |
| ·PPV弱毒疫苗 | 第17页 |
| ·PPV灭活疫苗 | 第17-19页 |
| ·PPV基因工程疫苗 | 第19-21页 |
| 5 本实验室PPV变异株的发现 | 第21-24页 |
| 6 PPV的检测方法 | 第24-29页 |
| 7 PPV的防治措施 | 第29-30页 |
| 第二章 PPV变异株VP2-a蛋白的纯化 | 第30-43页 |
| 1 材料 | 第30-35页 |
| ·菌株 | 第30-31页 |
| ·试剂和溶液配置 | 第31-35页 |
| 2 方法 | 第35-38页 |
| ·表达条件的优化 | 第35页 |
| ·重组蛋白的大量诱导表达 | 第35页 |
| ·重组蛋白包涵体的洗涤与纯化 | 第35-36页 |
| ·VP2-a蛋白镍柱纯化 | 第36页 |
| ·VP2-a蛋白的复性 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度,纯度的检测及保存 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·蛋白最佳表达条件 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的纯化和复性 | 第39-41页 |
| ·蛋白浓度与纯度 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 猪细小病毒变异株ELISA检测方法的建立 | 第43-59页 |
| 1 材料与试剂 | 第43-45页 |
| ·抗原 | 第43页 |
| ·血清 | 第43-44页 |
| ·溶液和试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-48页 |
| ·反应板均一性的测定 | 第45页 |
| ·抗原包被浓度和血清稀释倍数的确定 | 第45-46页 |
| ·酶标二抗最适工作浓度的确定 | 第46页 |
| ·封闭液的确定 | 第46页 |
| ·血清最适作用时间的确定 | 第46页 |
| ·酶标二抗最适作用时间的确定 | 第46页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第46页 |
| ·间接ELISA阴阳性的判断 | 第46-47页 |
| ·特异性试验 | 第47页 |
| ·重复性试验 | 第47页 |
| ·PPV变异株血清流行病学初步调查 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-54页 |
| ·反应板均一性的测定 | 第48页 |
| ·最适包被浓度与血清稀释度的确定 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗最适工作浓度的确定 | 第49页 |
| ·最适封闭液的确定 | 第49-50页 |
| ·血清最适作用时间的确定 | 第50-51页 |
| ·酶标二抗最适作用时间的确定 | 第51页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第51页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第51-52页 |
| ·阻断试验 | 第52页 |
| ·重复性实验 | 第52-53页 |
| ·PPV变异株血清流行病学初步调查 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| 本研究的创新点及后续研究工作 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录一 抗体水平柱状图 | 第66-71页 |
| 附录二 攻读硕士期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
