| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-26页 |
| ·防御素的分类、分布及结构特点 | 第15-16页 |
| ·防御素的生物学功能与特点 | 第16-17页 |
| ·广谱抗微生物 | 第16页 |
| ·作用快速、安全、无残留 | 第16页 |
| ·防御素结构和生物学活性的关系 | 第16-17页 |
| ·作用机制独特 | 第17页 |
| ·防御素的作用机制 | 第17-19页 |
| ·胞膜攻击作用 | 第17页 |
| ·诱导细胞凋亡 | 第17-18页 |
| ·线粒体攻击作用 | 第18页 |
| ·对细胞核染色体的影响 | 第18页 |
| ·对癌细胞骨架的断裂作用 | 第18页 |
| ·抑制蛋白质及细胞壁合成 | 第18-19页 |
| ·防御素的原核表达 | 第19-20页 |
| ·原核表达载体的类型 | 第19页 |
| ·E.coli 的融合表达 | 第19-20页 |
| ·防御素的毕赤酵母表达 | 第20-23页 |
| ·酵母表达载体的特征 | 第20-21页 |
| ·巴氏毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第21-22页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第22-23页 |
| ·防御素基因的体外表达 | 第23-25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-37页 |
| ·试验材料 | 第26-29页 |
| ·实验动物的来源及处理 | 第26页 |
| ·菌株与载体 | 第26页 |
| ·酶和生化试剂 | 第26页 |
| ·Tricine SDS-PAGE 电泳主要试剂 | 第26-27页 |
| ·培养基及有关的溶液配制 | 第27-28页 |
| ·主要仪器及设备 | 第28-29页 |
| ·试验方法 | 第29-37页 |
| ·PBD-1 基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·PBD-1M 基因设计与人工合成 | 第31-32页 |
| ·pPIC9-PBD-1 重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·pGAP-PBD-1 重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·pPIC9-PBD-1M 重组质粒的构建 | 第32页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第32-34页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第34页 |
| ·表达产物的浓缩 | 第34-35页 |
| ·重组表达抗菌肽的Tricine-SDS-PAGE 分析 | 第35-36页 |
| ·表达产物的体外抑菌活性实验 | 第36-37页 |
| 3 结果和分析 | 第37-48页 |
| ·PBD-1 基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·PBD-1M 基因设计与人工合成 | 第38页 |
| ·pPIC9-PBD-1 重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·pGAP-PBD-1 重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| ·pPIC9-PBD-1M 重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第41-44页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达及 Tricine-SDS-PAGE 检测 | 第44-46页 |
| ·抑菌活性的检测 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-55页 |
| ·PBD-1M 基因序列的设计 | 第48页 |
| ·毕赤酵母表达 | 第48-51页 |
| ·毕赤酵母的转化方法 | 第48-49页 |
| ·重组酵母宿主菌的选择 | 第49页 |
| ·启动子的选择 | 第49-50页 |
| ·信号肽的选择 | 第50页 |
| ·表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE 电泳分析 | 第51-52页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE 电泳 | 第51-52页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE 电泳结果影响因素 | 第52页 |
| ·表达产物的浓缩 | 第52-53页 |
| ·抑菌活性的检测 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67页 |
