| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| ·链霉菌AM-7161 | 第9-12页 |
| ·链霉菌和抗生素 | 第9-10页 |
| ·芳香聚酮抗生素和聚酮合成酶 | 第10-11页 |
| ·美达霉素及Streptomyces sp.AM-7161 | 第11-12页 |
| ·链霉菌遗传操作系统 | 第12-14页 |
| ·链霉菌遗传操作系统的建立 | 第12-14页 |
| ·美达霉素产生菌遗传操作系统的建立和优化 | 第14页 |
| ·C-糖基化和C-糖基转移酶 | 第14-17页 |
| ·糖基化 | 第14页 |
| ·C-糖基化 | 第14-16页 |
| ·C-糖基转移酶 | 第16-17页 |
| ·链霉菌基因的原核表达 | 第17-19页 |
| ·大肠杆菌原核表达系统 | 第17页 |
| ·大肠杆菌表达的载体 | 第17-19页 |
| ·本项目研究的内容和意义: | 第19-20页 |
| ·体外研究C-糖基转移酶Med-ORF8的内容和意义 | 第19页 |
| ·Streptomyces sp AM-7161遗传操作系统优化的内容和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-28页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20-21页 |
| ·试剂 | 第21-26页 |
| ·大肠杆菌质粒提取试剂 | 第21页 |
| ·Western Blotting试剂 | 第21-24页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第24-25页 |
| ·链霉菌质粒提取试剂 | 第25页 |
| ·缓冲液 | 第25页 |
| ·抗生素和试剂 | 第25-26页 |
| ·酶和生化试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-28页 |
| ·大肠杆菌液体培养基 | 第26页 |
| ·大肠杆菌固体培养基 | 第26页 |
| ·链霉菌固体产孢培养基 | 第26-27页 |
| ·链霉菌液体培养基 | 第27页 |
| ·链霉菌再生培养基 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-37页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第29页 |
| ·链霉菌培养 | 第29-31页 |
| ·接合转移 | 第31-32页 |
| ·DNA体外操作 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·Western Blotting | 第33-35页 |
| ·蛋白纯化 | 第35页 |
| ·DNA纯化 | 第35-37页 |
| 第三章 链霉菌AM-7161遗传操作系统的建立 | 第37-51页 |
| ·Streptomyces sp AM-7161不同培养条件的优化 | 第37-39页 |
| ·AM-7161对抗生素敏感性的测定 | 第37-38页 |
| ·产孢培养基的优化 | 第38-39页 |
| ·菌丝体生长培养基的优化 | 第39页 |
| ·链霉菌Streptomyces sp AM-7161原生质体的制备和再生条件的优化 | 第39-42页 |
| ·链霉菌AM-7161的原生质体转化 | 第42-47页 |
| ·整合型外源质粒DNA转化链霉菌AM-7161原生质体 | 第42-45页 |
| ·自主复制型质粒pWHM4~*转化链霉菌AM-7161原生质体 | 第45-47页 |
| ·接合转移 | 第47-49页 |
| ·pSET152通过接合转移进入AM-7161 | 第48-49页 |
| ·接合转移子的分子水平验证 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 链霉菌AM-7161中的C-糖基转移酶基因med-ORF8表达质粒的构建和表达系统的建立 | 第51-64页 |
| ·med-ORF8基因扩增 | 第52页 |
| ·扩增产物的序列验证 | 第52-55页 |
| ·med-ORF8的表达质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·原核表达重组菌的构建 | 第57-58页 |
| ·Med-ORF8的诱导表达 | 第58-62页 |
| ·初步诱导表达 | 第58页 |
| ·目的蛋白存在部位的检测 | 第58-59页 |
| ·优化诱导条件 | 第59-60页 |
| ·Western blotting验证目的蛋白带 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 总结和展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 硕士期间发表论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
