| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1. 前言 | 第12-20页 |
| ·液泡加工系统 | 第12-13页 |
| ·植物VPE 的亚家族 | 第13页 |
| ·VPE 的底物专一性 | 第13页 |
| ·VPE 的生物合成 | 第13-14页 |
| ·VPEs 的生理作用 | 第14-19页 |
| ·VPEs 在种子贮藏蛋白加工过程中的作用 | 第14页 |
| ·VPE 通过裂解Asn-Gln 键产生功能蛋白 | 第14-15页 |
| ·VPE 在细胞程序性死亡中的作用 | 第15-18页 |
| ·VPE 与caspase 在结构上的相似性 | 第15页 |
| ·VPE 与caspase 在功能上的相似性 | 第15-17页 |
| ·VPE 与caspase 在调控PCD 机制上的相似性 | 第17-18页 |
| ·VPE 在植物衰老过程及胁迫条件下的作用 | 第18-19页 |
| ·本研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·试材 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·酶及生化试剂 | 第20页 |
| ·PCR 引物 | 第20-21页 |
| ·试验方法 | 第21-36页 |
| ·平邑甜茶总RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·改进快速CTAB法提取步骤 | 第21页 |
| ·传统CTAB 法和SLS 法提取RNA 步骤 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR 反转录合成cDNA | 第22-23页 |
| ·MhVPE 全长序列的扩增 | 第23-28页 |
| ·巢式PCR 扩增MhVPE 中间片段 | 第23-24页 |
| ·3’-RACE 法扩增 3’端序列 | 第24-25页 |
| ·5’RACE 获得5’端序列 | 第25-28页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29页 |
| ·碱法小量质粒DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·凝胶电泳中DNA 片段的回收 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·DNA 序列测定 | 第31页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 基因正义表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·MhVPE 基因反义表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第33-35页 |
| ·生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-70页 |
| ·果树RNA 提取方法的改进 | 第36-38页 |
| ·改进快速CTAB 法与传统CTAB 法及SLS 法的比较 | 第36-37页 |
| ·改进快速CTAB 法提取不同果树材料RNA 的效果 | 第37-38页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·MhVPE 中间片段的分离 | 第38-39页 |
| ·MhVPE 5’片段的分离 | 第39页 |
| ·MhVPE 3’片段的分离 | 第39页 |
| ·MhVPE 全长cDNA 的分离 | 第39页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 核苷酸分析 | 第39-45页 |
| ·平邑甜茶MhVPE核苷酸序列 | 第42页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 密码子偏好性分析 | 第42-44页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 甲基化位点预测 | 第44-45页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 编码蛋白的结构分析 | 第45-59页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 一级结构分析 | 第45-52页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 氨基酸组成及理化性质分析 | 第45-46页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 疏水性/亲水性分析 | 第46-48页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 与其他VPE 氨基酸序列同源性分析 | 第48-50页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 与其他VPE 蛋白的聚类分析 | 第50-52页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 二级结构及属性分析 | 第52-58页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 二级结构分析 | 第52-56页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 跨膜区分析 | 第56-58页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 空间结构预测 | 第58-59页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 折叠化状态分析 | 第58页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 三维结构预测 | 第58-59页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 功能分析 | 第59-67页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 修饰位点分析 | 第59-61页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 信号肽分析 | 第61-63页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 亚细胞定位分析 | 第63-64页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 生理功能预测 | 第64-66页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 与人类hcapase-1 的比较 | 第66-67页 |
| ·平邑甜茶MhVPE 表达载体的构建 | 第67-70页 |
| ·转基因烟草正义表达载体 pBI121-MhVPE 的构建 | 第67-69页 |
| ·反义表达载体 pBI121-anti-MhVPE 的构建 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-73页 |
| ·果树 RNA 提取技术 | 第70页 |
| ·平邑甜茶 MhVPE 基因的克隆与分析 | 第70-73页 |
| 5. 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间完成论文情况 | 第81页 |
