| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-26页 |
| ·海因酶的历史 | 第10-11页 |
| ·海因酶的分类 | 第11-16页 |
| ·根据海因酶转化产物光学活性的不同进行分类 | 第11-13页 |
| ·根据其作用底物的不同分类 | 第13-16页 |
| ·海因酶的分布 | 第16页 |
| ·海因酶的性质 | 第16-21页 |
| ·酶的底物选择性 | 第16-17页 |
| ·酶的立体选择性 | 第17-18页 |
| ·酶的热稳定性 | 第18-19页 |
| ·酶的诱导性 | 第19-20页 |
| ·辅助因子和亚基组成 | 第20-21页 |
| ·海因酶基因的分离和克隆表达 | 第21-23页 |
| ·D-和L-海因酶基因的分离及表达 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌中海因酶基因的分离及表达 | 第22-23页 |
| ·海因酶在氨基酸生产中的应用 | 第23页 |
| ·海因酶研究的前景展望 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 实验内容 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·载体 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·溶液和缓冲液 | 第26-30页 |
| ·分子克隆工具酶及重要生化试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-42页 |
| ·细菌总DNA 的分离提取 | 第30-31页 |
| ·质粒（pUC19）DNA 的提取 | 第31页 |
| ·海因氧化酶目的基因片段的扩增 | 第31-32页 |
| ·目的片段的回收及纯化 | 第32-33页 |
| ·酶切反应 | 第33-34页 |
| ·DNA 凝胶电泳 | 第34页 |
| ·载体与目的片段连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态细胞的制备-CaCl_2 法 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化及α互补的筛选 | 第35页 |
| ·鉴定重组子 | 第35-36页 |
| ·海因氧化酶基因序列测定、同源性比较 | 第36页 |
| ·海因氧化酶基因B 的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第37-38页 |
| ·重组子的酶切及回收 | 第38页 |
| ·质粒（pET28a）DNA 的提取 | 第38页 |
| ·pET28a 的酶切及去磷酸化反应 | 第38-39页 |
| ·载体pET28a 与目的片段连接 | 第39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·鉴定重组子 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌BL21 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·大肠杆菌Rostta 感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·海因氧化酶基因B 的诱导表达 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-65页 |
| ·海因氧化酶基因的扩增 | 第42页 |
| ·目的片段的回收及载体、目的片段的限制性酶切 | 第42-43页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第43-65页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·重组质粒对大肠杆菌的转化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒基因的鉴定 | 第45-56页 |
| ·海因氧化酶表达的SDS-PAGE 检测 | 第56-58页 |
| ·海因氧化酶基因的分析及功能预测结果 | 第58-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| ·PCR 反应条件的筛选，优化 | 第65页 |
| ·重组质粒的构建和克隆的筛选 | 第65-66页 |
| ·重组菌株的鉴定 | 第66-67页 |
| ·pUC19 为载体的重组菌株的鉴定 | 第66-67页 |
| ·pET28a 为载体的重组菌株的鉴定 | 第67页 |
| ·重组菌株在大肠杆菌中的表达 | 第67-68页 |
| ·利用生物信息学对海因氧化酶基本性质的预测 | 第68-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78页 |