| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪言 | 第15-32页 |
| ·产气荚膜梭菌概述 | 第15-16页 |
| ·产气荚膜梭菌的定型 | 第16-17页 |
| ·产气荚膜梭菌的毒素 | 第17-26页 |
| ·主要毒素 | 第17-24页 |
| ·产气荚膜梭菌导致的疾病 | 第24-26页 |
| ·产气荚膜梭菌诊断研究进展 | 第26-27页 |
| ·产气荚膜梭菌疫苗研究进展 | 第27-32页 |
| ·产气荚膜梭菌芽孢及其ε毒素的危害 | 第27-28页 |
| ·产气荚膜梭菌气性坏疽病疫苗 | 第28-29页 |
| ·产气荚膜梭菌ε毒素疫苗 | 第29-31页 |
| ·产气荚膜梭菌灭活苗研究概况 | 第31-32页 |
| 第二章 A型产气荚膜梭菌的分离与鉴定 | 第32-40页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·病料 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·涂片和镜检 | 第34页 |
| ·细菌的分离培养 | 第34页 |
| ·生化鉴定 | 第34页 |
| ·血清中和试验 | 第34-35页 |
| ·α毒素基因的PCR检测与核苷酸序列分析 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·革兰氏染色镜检 | 第36-37页 |
| ·菌落形态与特性 | 第37页 |
| ·生化实验 | 第37-38页 |
| ·血清中和实验 | 第38页 |
| ·PCR检测与序列分析 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 产气荚膜梭菌的多重PCR定型及其应用研究 | 第40-48页 |
| ·材料和方法 | 第41-44页 |
| ·菌株和培养基 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器与设备 | 第42页 |
| ·菌株培养与模板制备 | 第42页 |
| ·目的基因的多重PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·多重PCR方法的敏感性和特异性试验 | 第43-44页 |
| ·多重PCR对粪样的扩增 | 第44页 |
| ·临床阳性样品PCR产物测序分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·多重PCR方法的建立 | 第44-45页 |
| ·特异性试验 | 第45页 |
| ·敏感性试验 | 第45页 |
| ·羊粪样品的检测结果 | 第45-47页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 产气荚膜梭菌α毒素单抗的制备与应用 | 第48-64页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·抗原、细胞株、动物 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-50页 |
| ·细胞培养与检测用试剂 | 第48-49页 |
| ·其他生化试剂 | 第49-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-57页 |
| ·动物免疫、筛选方法的建立及小鼠抗体效价测定 | 第50-51页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第51-53页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第54页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第54-56页 |
| ·单抗夹心ELISA方法的初步建立 | 第56-57页 |
| ·单抗捕获ELISA方法的初步应用 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-62页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立及小鼠抗体效价的检测 | 第57-58页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立与鉴定 | 第58-61页 |
| ·单抗夹心ELISA方法的建立 | 第61页 |
| ·单抗夹心ELISA方法的初步应用 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 荧光定量PCR检测产气荚膜梭菌毒素方法的建立及应用 | 第64-72页 |
| ·材料和方法 | 第65-68页 |
| ·菌株和载体 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器与设备 | 第65页 |
| ·粪样的采集与保存 | 第65-66页 |
| ·细菌基因组DNA的提取与标准质粒的构建 | 第66页 |
| ·粪样中细菌DNA的提取 | 第66页 |
| ·引物和探针的制备 | 第66页 |
| ·荧光定量多重PCR的条件 | 第66-68页 |
| ·特异性分析 | 第68页 |
| ·敏感性分析 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-70页 |
| ·特异性分析结果 | 第68页 |
| ·敏感性分析结果 | 第68页 |
| ·奶牛粪样中产气荚膜梭菌毒素基因的检测 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第六章 产气荚膜梭菌ε毒素及其突变体的表达与免疫研究 | 第72-85页 |
| ·材料与方法 | 第72-78页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器和设备 | 第73页 |
| ·D型产气荚膜梭C60-2的培养 | 第73页 |
| ·产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆与序列分析 | 第73-74页 |
| ·产气荚膜梭菌ε毒素基因原核表达载体的构建和表达 | 第74-75页 |
| ·产气荚膜梭菌ε毒素突变体的构建 | 第75-76页 |
| ·ε毒素及其突变体对MDCK细胞的作用 | 第76页 |
| ·ε毒素及其突变体疫苗的制备和免疫原性的研究 | 第76-78页 |
| ·结果 | 第78-82页 |
| ·ε毒素基因的克隆与序列分析 | 第78-79页 |
| ·ε毒素基因表达质粒的构建与表达 | 第79-81页 |
| ·ε毒素及其突变体对MDCK细胞的作用 | 第81页 |
| ·产气荚膜梭菌类毒素疫苗的免疫原性研究 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| 第七章 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
