| 致谢 | 第1-8页 |
| 前言 | 第8-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 论文创新点 | 第16-17页 |
| 缩写、符号清单、术语表 | 第17-24页 |
| 第一部分ES细胞体外分化为心肌细胞过程JP2蛋白表达规律和功能特征 | 第24-55页 |
| 引言 | 第24-26页 |
| 1 试剂与器材 | 第26-28页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·实验仪器和器材 | 第26-27页 |
| ·小鼠ES细胞定向分化为心肌细胞用溶液 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-36页 |
| ·小鼠ES细胞体外分化为心肌细胞步骤 | 第28-30页 |
| ·RT-PCR法检测JP1,2基因表达 | 第30-32页 |
| ·免疫细胞荧光成像检测JP1,2和钙离子调节蛋白 | 第32页 |
| ·流式细胞术检测JP2、Troponin-T和α-Actinin表达 | 第32页 |
| ·Western blot法检测JP2等相关蛋白表达 | 第32-33页 |
| ·Percoll不连续密度梯度离心法分离ES细胞衍生心肌细胞 | 第33页 |
| ·siJp2干扰ES细胞或ES细胞衍生心肌细胞 | 第33-34页 |
| ·JC-1染色检测线粒体膜电位 | 第34页 |
| ·胞浆钙离子浓度测定 | 第34-35页 |
| ·扫描电镜生物样品制备 | 第35页 |
| ·统计处理 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-51页 |
| ·ES细胞培养及体外分化为心肌细胞 | 第36-37页 |
| ·免疫荧光成像原位检测ES细胞分化心肌中JP1,2表达 | 第37-38页 |
| ·ES细胞心肌分化过程Jp1,2基因蛋白检测 | 第38-39页 |
| ·流式细胞术定量检测ES细胞分化心肌细胞中JP2表达 | 第39-40页 |
| ·免疫荧光成像原位检测ES细胞分化心肌中钙调控蛋白表达 | 第40-41页 |
| ·ES细胞心肌分化过程钙调控蛋白表达 | 第41-42页 |
| ·siJp2干扰ES细胞后对心肌分化搏动率影响 | 第42-43页 |
| ·siJp2干扰ES细胞对胚层发育及前心肌细胞等标记基因影响 | 第43-44页 |
| ·免疫荧光成像检测siJp2干扰ES细胞对心肌相关蛋白表达影响 | 第44-45页 |
| ·siJp2干扰ES细胞衍生心肌细胞及干扰结果检测 | 第45-46页 |
| ·siJp2干扰ES细胞分化心肌细胞对心肌肥大及相关基因影响 | 第46-47页 |
| ·siJp2干扰ES细胞衍生心肌细胞后胞内Ca~(2+)水平检测 | 第47-48页 |
| ·siJp2干扰衍生心肌细胞对线粒体膜电位和相关细胞器影响 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 第二部分淫羊藿苷促ES细胞体外心肌分化过程JP2蛋白表达研究 | 第55-65页 |
| 引言 | 第55-56页 |
| 1 试剂与器材 | 第56页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·实验仪器和器材 | 第56页 |
| ·小鼠ES细胞分化为心肌细胞用溶液 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56-58页 |
| ·小鼠ES细胞体外分化为心肌细胞 | 第56页 |
| ·免疫荧光成像原位检测JP2表达 | 第56页 |
| ·流式细胞术检测JP2和α-Actinin表达 | 第56-57页 |
| ·Western blot法检测Troponin-T,JP2和α-Actinin蛋白表达 | 第57页 |
| ·Percoll不连续密度梯度离心法分离ES细胞衍生心肌细胞 | 第57页 |
| ·统计处理 | 第57-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-63页 |
| ·显微镜下统计EB搏动率评价ICA促心肌细胞分化效果 | 第58页 |
| ·免疫荧光成像原位检测心肌分化中ICA对JP2表达影响 | 第58-59页 |
| ·Western blot法检测心肌分化中ICA对心肌相关蛋白表达影响 | 第59页 |
| ·流式细胞术定量检测心肌分化中ICA对JP2和α-Actinin影响 | 第59-60页 |
| ·Western blot法检测ICA对纯化心肌细胞中相关蛋白表达影响 | 第60-61页 |
| ·流式细胞术定量检测ICA对纯化心肌细胞中JP2等蛋白表达影响 | 第61-62页 |
| ·胞浆钙离子浓度测定评价ICA对分化心肌细胞功能影响 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 第三部分 黄酮类化合物经由蛋白异戊烯化调控ES细胞分化心肌细胞机制 | 第65-89页 |
| 引言 | 第65-67页 |
| 1 试剂与器材 | 第67-68页 |
| ·实验动物及细胞株 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·实验仪器和器材 | 第67页 |
| ·小鼠ES细胞分化为心肌细胞用溶液 | 第67-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-70页 |
| ·小鼠ES细胞体外定向分化为心肌细胞步骤 | 第68页 |
| ·RT-PCR法检测Racl和PI3K基因表达 | 第68页 |
| ·免疫荧光成像原位检测α-Actinin表达 | 第68页 |
| ·Western blot法检测Troponin-T,JP2和α-Actinin蛋白表达 | 第68-69页 |
| ·荧光显微镜检测EBs内ROS水平 | 第69页 |
| ·统计处理 | 第69-70页 |
| 3 实验结果 | 第70-85页 |
| ·组合化学小分子化合物库内黄酮类化合物初级筛选 | 第70-72页 |
| ·ES细胞心肌分化模型次级筛选库内黄酮类化合物 | 第72-73页 |
| ·异戊烯基转移酶抑制剂GGTI-298对ES细胞心肌分化影响 | 第73-74页 |
| ·GGTI-298对心肌相关蛋白表达及MAPK通路影响 | 第74-76页 |
| ·FTI-277对心肌相关蛋白表达及MAPK通路影响 | 第76-78页 |
| ·PI3K抑制剂LY294002对心肌相关蛋白表达及MAPK通路影响 | 第78-80页 |
| ·ICA对异戊烯化相关靶点Rac1和PI3K表达影响 | 第80-81页 |
| ·Western blot法检测GGTI-298对PI3K通路影响 | 第81-82页 |
| ·Western blot法检测FTI-277对PI3K通路影响 | 第82-83页 |
| ·Western blot法检测LY294002对PI3K通路影响 | 第83-84页 |
| ·荧光显微镜检测加药后EBs内ROS水平 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 文献综述:Junctophilin-2生物学特征及研究进展 | 第95-104页 |
| 参考文献 | 第102-104页 |
| 附录1:大鼠心脏胚胎发育过程JP1,2基因蛋白表达检测 | 第104-105页 |
| 附录2:P19畸胎瘤细胞转染及体外培养和分化成心肌细胞 | 第105-109页 |
| 作者简历及在学期间取得奖项与科研成果 | 第109-112页 |
