| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-20页 |
| 一、Pax基因家族 | 第9-12页 |
| 1. Pax基因家族 | 第9-10页 |
| 2. Pax基因家族在胚胎发育中的作用 | 第10-12页 |
| 二、Pax6基因 | 第12-14页 |
| 1. Pax6基因简介 | 第12-13页 |
| 2. Pax6基因在眼发育中的功能 | 第13-14页 |
| 三、Pax6基因突变体及选择性剪切 | 第14-16页 |
| 四、花背蟾蜍Pax6及Pax6 variant简介 | 第16-18页 |
| 五、实验动物简介 | 第18-19页 |
| 六、实验思路及意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-39页 |
| 一、实验仪器与材料 | 第20-27页 |
| 1. 实验材料 | 第20页 |
| 2. 实验仪器和设备 | 第20-21页 |
| 3. 实验药品和试剂 | 第21页 |
| 4. 主要生物信息学软件及数据库 | 第21-22页 |
| 5. 菌株及载体 | 第22-24页 |
| 6. 引物 | 第24页 |
| 7. 各种溶液及培养基的配制 | 第24-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-39页 |
| 1. 基因克隆及原核表达载体的构建 | 第27-32页 |
| 2. 表达条件的优化 | 第32-34页 |
| 3. 蛋白大量表达及纯化 | 第34-36页 |
| 4. 小鼠多克隆抗血清的制备 | 第36页 |
| 5. 多克隆抗体的纯化及鉴定 | 第36-39页 |
| 实验结果 | 第39-47页 |
| 一、Pax6 Variant ORF全序列的克隆 | 第39-40页 |
| 1. 胚胎组织总RNA提取电泳检测 | 第39页 |
| 2. Pax6及Pax6 Variant的鉴定 | 第39-40页 |
| 3. Pax6 variant ORF全序列扩增电泳图 | 第40页 |
| 二、pET-Pax6 variant原核表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 1. pMD18-T-Pax6 variant酶切电泳图 | 第40-41页 |
| 2. pET-Pax6 variant重组质粒的PCR检测 | 第41-42页 |
| 3. pET-Pax6 variant重组质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| 三、His-Pax6 variant融合蛋白的表达与纯化 | 第42-44页 |
| 1. 蛋白表达条件的优化 | 第42-43页 |
| 2. pET-Pax6 variant重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第43-44页 |
| 3. His-Pax6 variant融合蛋白的纯化 | 第44页 |
| 四、纯化蛋白的分析 | 第44-46页 |
| 1 纯化蛋白的浓度测定 | 第44页 |
| 2. Pax6野生型蛋白与Pax6 variant蛋白的二级结构预测 | 第44-46页 |
| 五、纯化抗体的分析鉴定 | 第46-47页 |
| 1. 纯化抗体的ELISA检测 | 第46页 |
| 2. 纯化抗体的Western blot鉴定 | 第46-47页 |
| 讨论 | 第47-57页 |
| 一、RNA的提取 | 第47页 |
| 二、真核基因的原核表达 | 第47-48页 |
| 三、多克隆抗体的制备 | 第48-51页 |
| 四、多克隆抗体的纯化 | 第51-52页 |
| 五、花背蟾蜍Pax6与Pax6 variant作用机制的探讨 | 第52-57页 |
| 附录 缩略词表 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 硕士期间的科研成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
