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家蚕限性黄茧Ys品种SSH cDNA文库构建及类胰凝乳蛋白酶基因的研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 文献综述第13-30页
 1 家蚕天然有色茧研究进展第13-21页
   ·家蚕天然有色茧概述第13-14页
   ·家蚕的茧色遗传第14-16页
   ·家蚕黄茧色决定基因第16-19页
   ·绿茧及其它茧色相关基因第19-21页
 2 家蚕功能基因组学研究概述第21-30页
   ·功能基因组学研究的主要技术方法第21-27页
   ·基因差异表达技术在家蚕功能基因组学研究中的应用第27-30页
第二章 研究目的内容与技术路线第30-32页
 1 目的与意义第30页
 2 研究内容第30-31页
 3 研究路线第31-32页
第三章 主要试剂与常用实验方法第32-44页
 1 常用试剂第32-38页
   ·主要生化试剂第32-33页
   ·主要试剂盒第33页
   ·酶类第33页
   ·Marker第33-34页
   ·菌株第34页
   ·培养基第34页
   ·缓冲液和常用试剂的配制第34-38页
 2 主要仪器设备第38-39页
 3 常用实验方法第39-44页
   ·总RNA 的抽提第39页
   ·RNA 反转录第39-40页
   ·PCR 扩增反应程序及加样体系第40-41页
   ·PCR 产物的回收第41页
   ·连接反应第41页
   ·CaCl_2 法制备E. coli 感受态细胞第41页
   ·重组DNA 的转化第41-42页
   ·重组质粒的筛选第42页
   ·碱裂解法少量制备质粒DNA第42-43页
   ·限制性内切酶反应第43-44页
第四章 家蚕限性黄茧Ys 品种SSH cDNA 文库的构建及分析第44-70页
 1 材料与方法第44-58页
   ·实验动物及其处理第44页
   ·引物与接头第44-45页
   ·总RNA 提取第45页
   ·家蚕总RNA 的质量检验第45-46页
   ·mRNA 的分离纯化第46-48页
   ·抑制性消减杂交第48-54页
   ·连接效率检验第54页
   ·消减效率检测第54-55页
   ·PCR 产物纯化第55-56页
   ·消减文库的构建第56-58页
 2 结果与分析第58-67页
   ·总RNA 的制备第58-59页
   ·抑制性消减杂交第59-62页
   ·消减效率分析第62-63页
   ·消减文库的构建第63页
   ·消减cDNA 文库插入片段的鉴定第63-64页
   ·测序结果分析第64-67页
 3 讨论第67-70页
   ·抑制性消减杂交的优缺点及质量检测第67-68页
   ·基于家蚕限性黄茧Ys 品种SSH cDNA 文库的注释基因分类第68-69页
   ·家蚕限性黄茧Ys 品种SSH 文库筛选的结果分析第69-70页
第五章 家蚕Ctlp 基因的克隆鉴定和序列分析第70-89页
 1 材料与方法第70-77页
   ·实验材料第70页
   ·引物设计第70页
   ·家蚕中肠总RNA 的准备第70-71页
   ·3′-RACE 反应第71-73页
   ·5′-RACE 反应第73-76页
   ·RACE 测序结果序列分析第76-77页
 2 结果与分析第77-87页
   ·RACE PCR 结果第77-78页
   ·家蚕Ctlp 基因的序列分析第78-79页
   ·家蚕 Ctlp 基因的染色体定位第79页
   ·家蚕 CTLP 蛋白序列分析第79-87页
 3 讨论第87-89页
   ·序列克隆第88页
   ·序列分析第88页
   ·分子进化第88-89页
第六章 家蚕Ctlp 基因的表达谱分析及原核表达研究第89-101页
 1 材料与方法第89-93页
   ·实验材料第89页
   ·引物设计第89-90页
   ·家蚕Ctlp 基因的EST 表达谱分析第90页
   ·家蚕Ctlp 基因的芯片表达谱分析第90页
   ·家蚕Ctlp 基因的组织表达谱分析第90页
   ·家蚕Ctlp 基因的Real-Time PCR 分析第90-91页
   ·家蚕Ctlp 基因的原核表达第91-93页
 2 结果与分析第93-99页
   ·家蚕Ctlp 基因的EST 表达谱分析第93-94页
   ·家蚕Ctlp 基因的芯片表达谱分析第94-95页
   ·家蚕Ctlp 基因的组织表达分析第95页
   ·家蚕Ctlp 基因的Real-Time PCR 结果分析第95-96页
   ·家蚕基因的原核表达第96-99页
 3 讨论第99-101页
   ·家蚕Ctlp 基因具有中肠表达特异性第99页
   ·家蚕Ctlp 基因在Ys 品种中的表达研究第99页
   ·家蚕Ctlp 基因可能不是原核高表达基因第99-101页
第七章 结论与讨论第101-104页
 1 主要结论第101-102页
   ·成功构建家蚕限性黄茧Ys 品种雌特异表达基因SSH cDNA 文库第101页
   ·克隆鉴定和序列分析了基因Ctlp第101-102页
   ·调查和分析了家蚕Ctlp 基因的表达谱第102页
   ·构建了Ctlp 基因原核表达系统第102页
 2 进一步研究方向第102-104页
参考文献第104-111页
研究生期间发表文章及成果第111-112页
论文资助项目第112-113页
附录第113-116页
致谢第116-117页

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