| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 综述 | 第12-23页 |
| ·小球藻的分子生物学研究 | 第12-15页 |
| ·小球藻叶绿体基因 | 第12-13页 |
| ·小球藻的重要功能基因 | 第13-14页 |
| ·小球藻用做基因工程的载体 | 第14-15页 |
| ·Rubisco 酶及其基因的研究 | 第15-20页 |
| ·Rubisco 酶的概述 | 第15-16页 |
| ·Rubisco 的结构与功能 | 第15-16页 |
| ·Rubisco 的活化与调节 | 第16页 |
| ·Rubisco 大亚基基因（rbcL）的研究 | 第16-17页 |
| ·Rubisco 小亚基基因（rbcS）的研究 | 第17-19页 |
| ·rbcS 的序列克隆与表达 | 第17-18页 |
| ·rbcS 的调控序列活性 | 第18页 |
| ·rbcS 的转运肽 | 第18-19页 |
| ·Rubisco 的基因工程研究 | 第19-20页 |
| ·绿色荧光蛋白（GFP）概述及在植物分子生物学中的研究 | 第20-23页 |
| ·GFP 的结构及其发光机制 | 第20页 |
| ·GFP 基因作为遗传标记和报告基因的优点 | 第20-21页 |
| ·GFP 在植物分子生物学中的研究 | 第21-22页 |
| ·GFP 作为报告基因用于转基因研究 | 第21页 |
| ·GFP 作为报告蛋白用于基因表达研究 | 第21-22页 |
| ·GFP 作为蛋白质研究的“荧光标签” | 第22页 |
| ·存在的问题 | 第22-23页 |
| 2 蛋白核小球藻rbcS cDNA 序列的克隆与分析 | 第23-37页 |
| ·材料和方法 | 第23-24页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·藻种 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-27页 |
| ·蛋白核小球藻总RNA 的提取 | 第24页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第24页 |
| ·rbcS 部分cDNA 片段的扩增 | 第24-25页 |
| ·序列测定及分析 | 第25页 |
| ·rbcS 基因的5’-RACE 和3’-RACE 扩增 | 第25-27页 |
| ·5’-RACE 扩增 | 第25-26页 |
| ·3’-RACE 扩增 | 第26-27页 |
| ·rbcS 基因全序列的获得和分析 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-35页 |
| ·rbcS 基因部分cDNA 片段的获得与分析 | 第27-28页 |
| ·蛋白核小球藻rbcS RACE 结果及全序列的获得 | 第28页 |
| ·蛋白核小球藻rbcS cDNA 序列的分析 | 第28-30页 |
| ·rbcS 基因密码子偏好性分析 | 第30-32页 |
| ·小球藻的系统树分析 | 第32-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 3 蛋白核小球藻rbcS DNA 序列的克隆与分析 | 第37-48页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·藻种 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·rbcS 部分DNA 片段的克隆 | 第37-38页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增 | 第38页 |
| ·核心片段纯化回收与克隆载体的连接及转化 | 第38页 |
| ·核心片段的序列测定及分析 | 第38页 |
| ·rbcS 已知部分 DNA 两侧未知序列的克隆 | 第38-40页 |
| ·基因组步移引物的设计 | 第38-39页 |
| ·基因组步移文库的构建 | 第39-40页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第39页 |
| ·基因组DNA 的酶切 | 第39页 |
| ·酶切DNA 的纯化 | 第39-40页 |
| ·酶切基因组DNA 片段与接头的连接 | 第40页 |
| ·rbcS 基因5’端未知序列的扩增及克隆 | 第40页 |
| ·rbcS 基因3’端未知序列的扩增及克隆 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·rbcS DNA 部分序列的获得 | 第40-41页 |
| ·rbcS 基因DNA 序列片段的分析 | 第41-42页 |
| ·基因组DNA 的酶切结果 | 第42-43页 |
| ·rbcS 基因全序列的获得及分析 | 第43-45页 |
| ·rbcS2 基因5’端序列的分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 4 蛋白核小球藻rbcS 基因启动子活性分析 | 第48-58页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·藻株，培养基和培养条件 | 第48页 |
| ·PCR 引物 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·报告基因表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·蛋白核小球藻820 基因组DNA 的提取 | 第49页 |
| ·820 rbcS 基因启动子片段的PCR 扩增 | 第49页 |
| ·pAcGFP1-1 质粒的转化和提取 | 第49-50页 |
| ·启动子片段及pAcGFP1-1 质粒的酶切和连接 | 第50-51页 |
| ·表达载体pAcGFP1-P 的鉴定 | 第51页 |
| ·盐生杜氏藻的电激转化 | 第51-52页 |
| ·盐生杜氏藻生长曲线的测定 | 第51页 |
| ·电激法转化 | 第51-52页 |
| ·转化藻株的荧光显微镜观测 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·报告基因载体的构建 | 第52-54页 |
| ·rbcS 基因启动子片段的扩增 | 第52页 |
| ·pAcGFP1-1 质粒的转化和提取 | 第52-53页 |
| ·启动子片段 pAcGFP1-1 质粒的酶切和连接 | 第53-54页 |
| ·表达载体 pAcGFP1-P 的鉴定 | 第54页 |
| ·盐生杜氏藻电激转化和观察 | 第54-57页 |
| ·不同对数生长时期对盐生杜氏藻电激转化效率的影响 | 第54-56页 |
| ·不同电激电压对盐生杜氏藻电激转化效率的影响 | 第56页 |
| ·不同启动子片段的活性分析 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 5 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 在学研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
