| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 研究背景与意义 | 第13-23页 |
| 1.1 低聚果糖的来源、功能特性与应用 | 第13-16页 |
| 1.1.1 低聚果糖来源与结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 低聚果糖特性与功能 | 第14-15页 |
| 1.1.3 低聚果糖的市场应用与工业生产 | 第15-16页 |
| 1.2 β-呋喃果糖苷酶与黑曲霉ATCC 20611 | 第16-18页 |
| 1.2.1 β-呋喃果糖苷酶结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 β-呋喃果糖苷酶功能与催化机理 | 第17-18页 |
| 1.3 黑曲霉ATCC 20611与其β-呋喃果糖苷酶基因fopA | 第18-20页 |
| 1.3.1 低聚果糖工业生产菌株—黑曲霉ATCC 20611 | 第18-19页 |
| 1.3.2 β-呋喃果糖苷酶基因fopA及其启动子 | 第19-20页 |
| 1.4 高浓度低聚果糖生产 | 第20-21页 |
| 1.5 本论文研究意义 | 第21-23页 |
| 第二章 黑曲霉ATCC 20611β-呋喃果糖苷酶基因fopA功能分析与高浓度低聚果糖制备 | 第23-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要培养基及培养条件 | 第26-27页 |
| 2.1.5 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.1.5.1 大肠杆菌质粒提取 | 第27页 |
| 2.1.5.2 质粒的酶切、DNA连接及大肠杆菌的转化 | 第27-28页 |
| 2.1.5.3 黑曲霉染色体的提取和PCR、融合PCR及琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.1.5.4. 黑曲霉的遗传转化 | 第29-31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.2.1 fopA敲除盒与过表达载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.2 fopA敲除菌株和过表达菌株的蔗糖发酵分析 | 第34-35页 |
| 2.2.3 fopA敲除菌株和过表达菌株的不同碳源利用分析 | 第35-36页 |
| 2.2.4 fopA敲除菌株利用优化55型低聚果糖组分 | 第36-39页 |
| 2.3 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 利用fopA基因启动子PfopA表达葡萄糖氧化酶优化低聚果糖合成 | 第40-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第41-47页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 PCR引物 | 第41-43页 |
| 3.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第43页 |
| 3.1.4 主要培养基以及培养条件 | 第43页 |
| 3.1.5 生物学操作方法 | 第43-46页 |
| 3.1.6 利用启动子PfopA表达绿色荧光蛋白 | 第46页 |
| 3.1.7 利用启动子PfopA表达β-葡萄糖苷酶BGL1 | 第46页 |
| 3.1.8 利用启动子PfopA表达葡萄糖氧化酶Gox | 第46-47页 |
| 3.1.9 葡萄糖氧化酶转化株在低聚果糖合成中的应用 | 第47页 |
| 3.1.10 利用fopA启动子表达兔瘟病毒VP60 | 第47页 |
| 3.2 结果与分析 | 第47-59页 |
| 3.2.1 fopA基因的酶活力检测与荧光定量检测 | 第47-49页 |
| 3.2.2 利用启动子PfopA表达葡萄糖氧化酶优化低聚果糖合成 | 第49-59页 |
| 3.2.2.1 利用启动子PfopA表达绿色荧光蛋白 | 第49-51页 |
| 3.2.2.2 利用启动子PfopA表达β-葡萄糖苷酶活力BGL1 | 第51-53页 |
| 3.2.2.3 利用启动子PfopA表达葡萄糖氧化酶GOX及优化低聚果糖合成 | 第53-57页 |
| 3.2.2.4 利用启动子PfopA尝试表达兔瘟病毒蛋白VP60 | 第57-59页 |
| 3.3 小结 | 第59-61页 |
| 第四章 一株低聚果糖合成新菌株的鉴定 | 第61-71页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-64页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第61-62页 |
| 4.1.2 PCR引物 | 第62页 |
| 4.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第62页 |
| 4.1.4 主要培养基以及培养条件 | 第62页 |
| 4.1.5 分子生物学操作方法 | 第62页 |
| 4.1.6 低聚果糖合成菌株分离和初步鶴 | 第62页 |
| 4.1.7 具有果糖基转移酶活性菌株的二次筛选 | 第62-63页 |
| 4.1.8 菌株形态分类与分子鉴定 | 第63页 |
| 4.1.9 不同碳源条件下真菌的生长和FFase的生产 | 第63-64页 |
| 4.1.10 低聚果糖合成反应与产物分析 | 第64页 |
| 4.1.11 用甘蔗糖蜜作为碳源生产FFase | 第64页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第64-70页 |
| 4.2.1 筛选具有FFase活性的真菌菌株 | 第64-65页 |
| 4.2.2 通过形态学分类和系统发育树分析鉴定XG21 | 第65-66页 |
| 4.2.3 不同碳源对细胞生长和酶生产的影响 | 第66-68页 |
| 4.2.4 低聚果糖合成分析 | 第68-69页 |
| 4.2.5 使用甘蔗糖蜜作为碳源改进FFase生产 | 第69-70页 |
| 4.3 小结 | 第70-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 攻读学位期间已发表的论文 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第82页 |
