| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·猪链球菌流行病学 | 第13-19页 |
| ·毒力(相关)因子 | 第13-16页 |
| ·核酸测序MLST分型 | 第16-17页 |
| ·核酸质谱MLST分型 | 第17-19页 |
| ·猪链球菌弱毒苗 | 第19-21页 |
| ·猪链球菌天然弱毒疫苗 | 第19页 |
| ·猪链球菌基因突变弱毒疫苗 | 第19-21页 |
| ·细菌生物被膜和猪链球菌新的毒力相关因子 | 第21-25页 |
| ·细菌生物被膜 | 第21-23页 |
| ·猪链球菌新的毒力相关因子 | 第23-25页 |
| 第二章 猪链球菌流行病学 | 第25-56页 |
| ·前言 | 第25-26页 |
| ·材料与方法 | 第26-33页 |
| ·细菌分离和鉴定 | 第26-27页 |
| ·猪源链球菌分群分析和猪链球菌鉴定 | 第27页 |
| ·猪链球菌血清型和基因型的鉴定 | 第27页 |
| ·对2型猪链球菌的生物被膜进行鉴定 | 第27-28页 |
| ·对猪2型链球菌的代表菌株测定其对小鼠的毒力 | 第28页 |
| ·药敏试验方法 | 第28页 |
| ·检测四环素相关抗性基因 | 第28页 |
| ·测定分析tetO序列 | 第28页 |
| ·MLST分析菌株 | 第28页 |
| ·提取基因组DNA | 第28-29页 |
| ·PCR扩增及测序 | 第29页 |
| ·MLST数据分析 | 第29-30页 |
| ·不同序列型的代表菌株对健康猪外周血抵抗能力的差异 | 第30页 |
| ·通过MALDI-TOF MS进行MLST分型 | 第30-31页 |
| ·数据统计分析 | 第31-33页 |
| ·结果 | 第33-49页 |
| ·菌株分离和鉴定 | 第33页 |
| ·猪链球菌的血清型和基因型鉴定 | 第33-36页 |
| ·2型猪链球菌菌株特征和毒力之间的关系 | 第36-38页 |
| ·四环素抗性测定与抗性基因检测 | 第38页 |
| ·MLST分型结果 | 第38-46页 |
| ·不同序列型的代表菌株对健康猪外周血抵抗能力 | 第46页 |
| ·疾病爆发相关信息 | 第46-49页 |
| ·用MALDI-TOF MS对分离菌株进行MLST分型 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-56页 |
| 第三章 生物被膜形成菌株初步应用 | 第56-73页 |
| ·前言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-63页 |
| ·天然弱毒株选取 | 第57页 |
| ·天然弱毒株安全性试验 | 第57-58页 |
| ·天然弱毒株免疫后抗体检测及攻毒保护 | 第58页 |
| ·天然菌株突变致弱相关引物及载体 | 第58-61页 |
| ·突变株构建 | 第61页 |
| ·突变株生长特性 | 第61页 |
| ·弱毒苗免疫及攻毒保护试验 | 第61-62页 |
| ·Autolysin诱导表达纯化及western验证 | 第62页 |
| ·ELISA分析Autolysin区分灭活苗血清和弱毒苗血清的能力 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-70页 |
| ·天然弱毒株仔猪安全测试结果 | 第63页 |
| ·天然弱毒株免疫抗体检测与攻毒保护结果 | 第63-64页 |
| ·载体与突变株的构建 | 第64-65页 |
| ·突变株的生长特性 | 第65页 |
| ·构建的弱毒缺失突变株对猪的安全性 | 第65-66页 |
| ·突变株疫苗的抗体产生规律 | 第66页 |
| ·突变株疫苗攻毒保护效果 | 第66-67页 |
| ·突变株疫苗攻毒保护病理分析 | 第67-69页 |
| ·Autolysin表达,western验证及区分灭活苗血清和弱毒苗血清的能力 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 生物被膜形成能力机制初步探讨及新的毒力相关基因发掘 | 第73-97页 |
| ·前言 | 第73-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-82页 |
| ·菌株,培养基,引物,载体 | 第75-76页 |
| ·猪链球菌全基因组表达谱芯片的设计与制备 | 第76页 |
| ·cDNA第一链和第二链"一步法"合成 | 第76-77页 |
| ·cRNA合成及标记 | 第77-78页 |
| ·cRNA样品片段化和芯片杂交 | 第78页 |
| ·芯片结果分析 | 第78页 |
| ·Real-time PCR验证相关基因的上调表达 | 第78-79页 |
| ·SYBR Green实时定量PCR | 第79页 |
| ·相对mRNA表达水平的计算 | 第79-80页 |
| ·相关基因突变对菌株生物被膜形成能力的影响 | 第80页 |
| ·相关基因的突变株对小鼠毒力测定 | 第80-81页 |
| ·细菌侵袭细胞实验 | 第81页 |
| ·细菌粘附细胞实验 | 第81页 |
| ·细胞毒性实验 | 第81-82页 |
| ·相关基因缺失突变株对抗猪外周血吞噬能力 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-92页 |
| ·Fibrinogen诱导猪链球菌转录水平的变化 | 第82-84页 |
| ·leuD和autolysin上调表达定量PCR验证 | 第84-85页 |
| ·突变株构建及验证 | 第85-88页 |
| ·相关基因缺失突变株及对应的回复突变菌株对生物被膜形成能力的影响 | 第88-89页 |
| ·相关基因缺失突变株及对应的回复突变菌株对Hep-2细胞的黏附侵袭能力差异 | 第89-90页 |
| ·相关基因缺失突变株及其对应的回复突变菌株对Hep-2细胞及SJPLC细胞毒性差异 | 第90-91页 |
| ·相关基因缺失突变株及对应的回复突变菌株对BALB/c小鼠毒力的差异 | 第91页 |
| ·相关基因缺失突变株及对应回复突变株抵抗猪外周血吞噬能力的差异 | 第91-92页 |
| ·讨论 | 第92-97页 |
| 第五章 结论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116页 |
