| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第9-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-37页 |
| 1.1 背景知识 | 第10-14页 |
| 1.1.1 成体黑腹果蝇肠道结构 | 第10-12页 |
| 1.1.2 成体黑腹果蝇肠道上皮干细胞 | 第12-14页 |
| 1.2 Snail家族转录因子 | 第14-18页 |
| 1.2.1 Snail家族转录因子成员介绍 | 第14-16页 |
| 1.2.2 Snail家族转录因子在果蝇发育阶段发挥重要作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Snail家族转录因子在肿瘤转移中作用 | 第17-18页 |
| 1.3 HLH家族转录因子 | 第18-20页 |
| 1.3.1 HLH家族转录因子成员介绍 | 第18-19页 |
| 1.3.2 HLH家族转录因子在果蝇肠道上皮中功能 | 第19-20页 |
| 1.4 Snail家族与HLH家族转录因子的共同作用 | 第20-21页 |
| 1.4.1 Snail家族与HLH家族转录因子在小鼠中的相互作用 | 第20页 |
| 1.4.2 Snail家族与HLH家族转录因子在线虫中的相互作用 | 第20-21页 |
| 1.4.3 Snail家族与HLH家族转录因子在果蝇中的相互作用 | 第21页 |
| 1.5 果蝇肠道干细胞命运调控 | 第21-34页 |
| 1.5.1 细胞间信号通路调控ISC细胞命运 | 第21-30页 |
| 1.5.2 转录因子调控ISC细胞命运 | 第30-34页 |
| 1.6 问题的提出 | 第34-35页 |
| 1.7 选题的意义 | 第35-36页 |
| 1.8 论文的结构 | 第36-37页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第37-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-40页 |
| 2.1.1 果蝇品系 | 第37-38页 |
| 2.1.2 一抗来源 | 第38-39页 |
| 2.1.3 二抗来源 | 第39页 |
| 2.1.4 试剂盒来源 | 第39-40页 |
| 2.2 实验仪器 | 第40页 |
| 2.3 实验操作系统 | 第40-44页 |
| 2.3.1 Gal4/UAS过表达系统 | 第40-42页 |
| 2.3.2 Flp-out系统 | 第42-44页 |
| 2.3.3 MARCM系统 | 第44页 |
| 2.4 实验方法 | 第44-50页 |
| 2.4.1 果蝇RNAi库筛选 | 第44-45页 |
| 2.4.2 果蝇培养与镶嵌型克隆诱导 | 第45页 |
| 2.4.3 果蝇肠道解剖与抗体染色 | 第45-46页 |
| 2.4.4 共聚焦显微镜使用 | 第46页 |
| 2.4.5 数据统计与分析 | 第46页 |
| 2.4.6 果蝇DNA提取 | 第46页 |
| 2.4.7 流式细胞仪筛选细胞 | 第46-47页 |
| 2.4.8 流式分选的细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.4.9 用于果蝇注射的质粒提取 | 第48-49页 |
| 2.4.10 果蝇肠道组织总RNA提取 | 第49页 |
| 2.4.11 反转录果蝇总cDNA | 第49-50页 |
| 2.5 实验试剂配备与来源 | 第50-51页 |
| 第3章 转录因子Esg在成体果蝇肠道干细胞中作用 | 第51-58页 |
| 3.1 实验方法 | 第51-52页 |
| 3.1.1 在成体果蝇ISC细胞中特异性敲低Esg的方法 | 第51页 |
| 3.1.2 追踪ISC细胞分裂产生的子代细胞方法 | 第51-52页 |
| 3.1.3 定量分析方法 | 第52页 |
| 3.2 实验结果 | 第52-57页 |
| 3.2.1 在干细胞中特异性敲低Esg促进内分泌细胞形成 | 第52-55页 |
| 3.2.2 在ISC细胞中敲低Esg致使ISC更倾向于分化产生ee细胞 | 第55-56页 |
| 3.2.3 在干细胞中特异性敲低Esg致使干细胞丢失 | 第56-57页 |
| 3.3 实验小结 | 第57-58页 |
| 第4章 转录因子Esg在前体细胞EB中作用 | 第58-64页 |
| 4.1 实验方法 | 第58-59页 |
| 4.1.1 特异性地在果蝇肠道前体细胞EB中敲低Esg的方法 | 第58页 |
| 4.1.2 追踪EB细胞子代细胞的方法 | 第58-59页 |
| 4.2 实验结果 | 第59-61页 |
| 4.2.1 在前体细胞中特异性敲低Esg加快前体细胞分化 | 第59-61页 |
| 4.2.2 在前体细胞中特异性敲低Esg不影响ee细胞产生 | 第61页 |
| 4.3 实验小结 | 第61-64页 |
| 4.3.1 在ISC和EB中敲低Esg均能导致细胞快速分化 | 第61-62页 |
| 4.3.2 在ISC中而不是在EB中敲低Esg能够使ee细胞分化增加 | 第62-64页 |
| 第5章 转录因子Esg与Sc/Ase平行地调控ee细胞分化 | 第64-71页 |
| 5.1 实验结果 | 第64-69页 |
| 5.1.1 敲低Sc/Ase能够挽救因敲低Esg导致的ee细胞增加的表型 | 第64-66页 |
| 5.1.2 过表达Esg能够挽救因Sc/Ase过表达导致的ee细胞增加的表型 | 第66-69页 |
| 5.2 实验小结 | 第69-71页 |
| 第6章 转录因子Esg与Sc拮抗性调控Pros表达 | 第71-77页 |
| 6.1 实验方法 | 第71页 |
| 6.1.1 特异性地在ee细胞中过表达Esg、Sc方法 | 第71页 |
| 6.2 实验结果 | 第71-75页 |
| 6.2.1 Esg作用于Pros上游调控ee细胞的分化 | 第71-72页 |
| 6.2.2 在ee细胞中过表达Esg抑制Pros表达 | 第72-73页 |
| 6.2.3 在ee细胞中过量表达Sc能够部分挽救Esg对Pros的抑制 | 第73-75页 |
| 6.3 实验小结 | 第75-77页 |
| 第7章 转录因子Esg与Sc竞争性结合Pros增强子 | 第77-85页 |
| 7.1 实验方法 | 第77-80页 |
| 7.1.1 ChIP-Seq方法 | 第77-78页 |
| 7.1.2 ChIP-Seq数据分析 | 第78页 |
| 7.1.3 prosenhancerLacZreporter构建 | 第78-79页 |
| 7.1.4 LacZ表达量定量分析 | 第79-80页 |
| 7.2 实验结果 | 第80-84页 |
| 7.2.1 Esg与Sc均能直接结合Pros | 第80页 |
| 7.2.2 Esg与Sc共同结合到Pros的增强子区域 | 第80-82页 |
| 7.2.3 Sc与Esg能够在体内调控Pros增强子区域的表达水平 | 第82-84页 |
| 7.3 实验小结 | 第84-85页 |
| 第8章 转录因子Esg、Sc与Notch信号在ee细胞分化中作用 | 第85-90页 |
| 8.1 实验结果 | 第85-88页 |
| 8.1.1 Esg与Notch平行或者作用在Notch下游 | 第85-87页 |
| 8.1.2 Sc作用于Notch下游调控ee细胞分化命运 | 第87-88页 |
| 8.2 实验小结 | 第88-90页 |
| 第9章 总结与展望 | 第90-99页 |
| 9.1 实验总结 | 第90-92页 |
| 9.1.1 ee细胞分化调控模型 | 第90-91页 |
| 9.1.2 Esg在ISC细胞而不是在EB细胞中调控ee细胞分化 | 第91-92页 |
| 9.2 实验展望 | 第92-99页 |
| 9.2.1 Esg如何调控ISC自我维持 | 第92-93页 |
| 9.2.2 Snail家族转录因子Sna抑制果蝇肠道干细胞分化 | 第93-95页 |
| 9.2.3 Snail与HLH家族转录因子 | 第95-96页 |
| 9.2.4 转录因子调控网 | 第96-97页 |
| 9.2.5 Snail与AS/C同源基因在哺乳动物肠道的作用 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第111页 |
