类珍珠层重组蛋白及其序列对碳酸钙矿化的影响
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| 1.1 生物矿化 | 第10-13页 |
| 1.1.1 定义生物矿化 | 第10-11页 |
| 1.1.2 几种天然生物矿物 | 第11-12页 |
| 1.1.3 生物矿物的特征 | 第12-13页 |
| 1.2 矿化机理 | 第13-18页 |
| 1.2.1 非经典结晶理论 | 第13-15页 |
| 1.2.2 介观晶体 | 第15-16页 |
| 1.2.3 无定形相 | 第16页 |
| 1.2.4 预成核簇 | 第16-17页 |
| 1.2.5 矿化过程机理研究 | 第17-18页 |
| 1.3 贝壳珍珠层的结构及模型 | 第18-22页 |
| 1.3.1 珍珠层结构 | 第18页 |
| 1.3.2 珍珠层和棱柱层的比较 | 第18-20页 |
| 1.3.3 贝壳生长过程 | 第20页 |
| 1.3.4 珍珠层的矿化模型 | 第20-22页 |
| 1.4 矿化相关研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4.1 珍珠层研究现状 | 第22-23页 |
| 1.4.2 有机基质和大分子 | 第23-24页 |
| 1.4.3 碳酸钙相关研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究的内容与意义 | 第25-28页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第25页 |
| 1.5.2 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第26-28页 |
| 第二章 实验与测试 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 菌株 | 第30页 |
| 2.1.4 质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第31页 |
| 2.1.6 培养基 | 第31页 |
| 2.2 实验方案 | 第31-42页 |
| 2.2.1 目的基因PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.2 构建载体 | 第33-34页 |
| 2.2.3 氯化钙法制备感受态细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.4 重组质粒的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.5 菌落PCR筛选 | 第36页 |
| 2.2.6 提取质粒 | 第36-38页 |
| 2.2.7 测序 | 第38页 |
| 2.2.8 诱导表达重组蛋白 | 第38页 |
| 2.2.9 SDS-PAGE全蛋白电泳 | 第38-39页 |
| 2.2.10 纯化重组蛋白 | 第39-41页 |
| 2.2.11 重组蛋白的透析 | 第41-42页 |
| 2.2.12 蛋白质定量 | 第42页 |
| 2.2.13 碳酸钙矿化实验 | 第42页 |
| 2.3 测试及表征方法 | 第42-44页 |
| 2.3.1 X射线衍射仪(XRD) | 第42-43页 |
| 2.3.2 场发射扫描电子显微镜(FESEM) | 第43页 |
| 2.3.3 傅立叶变换红外光谱仪(FTIR) | 第43页 |
| 2.3.4 圆二色谱(CD) | 第43-44页 |
| 第三章 两种重组蛋白的构建 | 第44-58页 |
| 3.1 设计目的基因序列 | 第44-45页 |
| 3.2 构建载体质粒 | 第45-49页 |
| 3.2.1 目的基因PCR扩增 | 第45-46页 |
| 3.2.2 双酶切反应 | 第46页 |
| 3.2.3 菌落PCR | 第46-47页 |
| 3.2.4 测序 | 第47-48页 |
| 3.2.5 构建载体质粒 | 第48-49页 |
| 3.3 表达重组蛋白 | 第49-51页 |
| 3.4 纯化与透析重组蛋白 | 第51-53页 |
| 3.4.1 纯化 | 第51-52页 |
| 3.4.2 透析 | 第52-53页 |
| 3.5 重组蛋白的活性检测 | 第53-57页 |
| 3.5.1 Chitin结合片段的功能验证 | 第53-55页 |
| 3.5.2 Ca~(2+)结合片段的功能验证 | 第55-57页 |
| 3.6 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 两种蛋白对碳酸钙矿化的不同调控 | 第58-76页 |
| 4.1 蛋白CCaS对CaCO_3矿化的影响 | 第58-65页 |
| 4.1.1 对照组实验 | 第58-59页 |
| 4.1.2 蛋白含量对矿化的影响 | 第59-61页 |
| 4.1.3 矿化时间对CaCO_3结晶的影响 | 第61-64页 |
| 4.1.4 温度和pH对CaCO_3结晶的影响 | 第64-65页 |
| 4.2 蛋白CSCa对CaCO_3矿化的影响 | 第65-75页 |
| 4.2.1 蛋白含量对矿化的影响 | 第65-69页 |
| 4.2.2 矿化时间对CaCO_3结晶的影响 | 第69-71页 |
| 4.2.3 体系pH对CaCO_3结晶的影响 | 第71-75页 |
| 4.3 结果及讨论 | 第75-76页 |
| 第五章 矿化机理相关分析 | 第76-84页 |
| 5.1 重组蛋白调控碳酸钙的矿化机制 | 第76-78页 |
| 5.2 不同因素对碳酸钙矿化结果的分析 | 第78-79页 |
| 5.2.1 蛋白含量 | 第78页 |
| 5.2.2 矿化时间 | 第78-79页 |
| 5.2.3 体系pH | 第79页 |
| 5.3 两种重组蛋白CCaS和CSCa的异同点 | 第79-83页 |
| 5.3.1 基因序列不同 | 第79-82页 |
| 5.3.2 物化性质不同 | 第82页 |
| 5.3.3 蛋白结构不同 | 第82-83页 |
| 5.4 小结 | 第83-84页 |
| 第六章 总结和展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 硕士期间发表成果 | 第91页 |
