| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型研究进展 | 第12-19页 |
| 1 病原学相关研究 | 第12-15页 |
| ·PCV2的发现与分类地位 | 第12-13页 |
| ·PCV2的形态与理化特性 | 第13页 |
| ·PCV2病毒基因组结构 | 第13-14页 |
| ·PCV2病毒所编码的蛋白及功能 | 第14-15页 |
| 2 PCV2与疾病 | 第15-17页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) | 第15-16页 |
| ·猪皮炎肾病综合征(PNDS) | 第16页 |
| ·猪呼吸道综合征(PRDC) | 第16页 |
| ·母猪繁殖障碍(PRF) | 第16-17页 |
| ·先天性震颇(CT) | 第17页 |
| 3 PCV2的致病机制 | 第17-19页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·PCV2与其他病原体的相互作用 | 第18-19页 |
| 第二章 Toll样受体研究进展 | 第19-24页 |
| 1 TLRs的概念及其相关配体 | 第19-20页 |
| 2 先天免疫中TLRs的信号传导途径 | 第20-21页 |
| 3 TLRs与免疫应答 | 第21-24页 |
| ·TLRs与先天免疫应答 | 第21-22页 |
| ·TLRs与获得性免疫应答 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-28页 |
| 第二部分 研究内容 | 第28-61页 |
| 第三章 浙江地区猪圆环病毒2型全基因组序列比较和分析 | 第28-39页 |
| 1 材料和方法 | 第29-33页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·病毒DNA提取 | 第29-30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·PCR检测组织病料中PCV2 | 第30-31页 |
| ·PCV2全基因组克隆与测序 | 第31-32页 |
| ·PCV2全基因组的PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物纯化 | 第31页 |
| ·连接 | 第31-32页 |
| ·CaCl_2法制备E.coli DH5α感受态细胞 | 第32页 |
| ·转化 | 第32页 |
| ·重组质粒鉴定和测序 | 第32页 |
| ·序列分析 | 第32-33页 |
| 2 结果 | 第33-37页 |
| ·组织病料中PCV2的PCR检测结果 | 第33页 |
| ·PCV2全基因组的克隆与序列测定 | 第33页 |
| ·基于全基因组的PCV2进化分析 | 第33-34页 |
| ·PCV2核衣壳蛋白氨基酸序列和选择压力分析 | 第34-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 先天免疫TLRs通路检测体系的建立及验证 | 第39-51页 |
| 1 材料和方法 | 第40-44页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·运用双荧光素酶检测系统研究相关TLRs通路 | 第40-43页 |
| ·脂质体法瞬时转染pNifty-Luc2、pRL-TK至RAW264.7细胞 | 第40-41页 |
| ·相关TLRs配体对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第41-43页 |
| ·运用荧光定量PCR法研究相关TLRs通路 | 第43-44页 |
| ·引物的设计与合成 | 第43页 |
| ·SYBR Green相对荧光定量法检测不同条件下TLRs表达量的差异 | 第43-44页 |
| 2 结果 | 第44-49页 |
| ·poly(I:C)与ODN1826对RAW264.7细胞生长情况的影响 | 第44-45页 |
| ·利用双荧光素酶报告基因检测TLR配体对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第45-47页 |
| ·poly(I:C)对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第45-46页 |
| ·ODN1826对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第46页 |
| ·氯喹与ODN1826对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第46-47页 |
| ·利用相对荧光定量检测TLR配体对TLRs mRNA表达量的影响 | 第47-49页 |
| ·相对荧光定量检测体系的建立 | 第47-48页 |
| ·相对荧光定量检测poly(I:C)对TLR3 mRNA表达量的影响 | 第48-49页 |
| ·相对荧光定量检测氯喹以及ODN1826对TLR9 mRNA表达量的影响 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 猪圆环病毒2型基因组及其片段对Toll样受体传导通路的影响 | 第51-59页 |
| 1 材料和方法 | 第51-56页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·试验所需单链DNA和双链DNA的制备 | 第52-55页 |
| ·引物设计与合成 | 第52页 |
| ·PCV2-SY4株全基因组PCR扩增与克隆 | 第52-53页 |
| ·单链DNA和双链DNA的PCR扩增 | 第53-55页 |
| ·单链DNA和双链对RAW264.7细胞NF-κB表达量的影响 | 第55-56页 |
| ·脂质体法瞬时转染pNifty-Luc2和pRL-TK至RAW264.7细胞 | 第55页 |
| ·PCV2不同单链DNA和双链DNA片段对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-57页 |
| ·单链DNA和双链DNA制备 | 第56页 |
| ·PCV2 SY4株全长、ORF1和ORF2的双链DNA与单链DNA对转染细胞NF-κB表达量的影响 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 结论与展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
