| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 朊蛋白疾病的概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 传染性海绵状脑病流行病学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 病原学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 PrPc结构与生理功能 | 第12-13页 |
| 1.1.4 致病机制 | 第13-14页 |
| 1.2 朊蛋白疾病的诊断 | 第14-17页 |
| 1.2.1 临床症状诊断 | 第14页 |
| 1.2.2 组织学病理检测 | 第14页 |
| 1.2.3 分子病理学诊断 | 第14-15页 |
| 1.2.4 免疫学方法诊断 | 第15-16页 |
| 1.2.4.1 免疫组织化学诊断 | 第15页 |
| 1.2.4.2 组织印迹方法诊断 | 第15页 |
| 1.2.4.3 酶链免疫吸附试验诊断 | 第15页 |
| 1.2.4.4 蛋白印迹 | 第15-16页 |
| 1.2.4.5 荧光标记肽链的毛细血管电泳免疫测定 | 第16页 |
| 1.2.5 实验动物接种检测 | 第16页 |
| 1.2.6 脑脊液检测 | 第16页 |
| 1.2.7 蛋白错误折叠循环扩增技术检测 | 第16-17页 |
| 1.3 朊蛋白疾病的治疗和预防 | 第17-18页 |
| 1.4 目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 重组牛朊蛋白的制备 | 第19-31页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试验仪器与设备 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 试验所用溶液及配制 | 第20-22页 |
| 2.1.4.1 重组菌诱导表达所用培养基的配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4.2 SDS-PAGE和WestenBlot所用试剂的配制 | 第21页 |
| 2.1.4.3 重组蛋白纯化所用溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE结果鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.1.1 重组菌的活化 | 第22页 |
| 2.2.1.2 重组菌的诱导表达 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 重组菌的大量诱导表达 | 第23页 |
| 2.2.2 重组蛋白的提取、纯化和复性 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 重组蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.2.2.2 重组蛋白的纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 重组蛋白纯化物的复性 | 第24页 |
| 2.2.2.4 纯化后重组蛋白SDS-PAGE鉴定结果 | 第24页 |
| 2.2.3 重组蛋白Western Blot鉴定结果 | 第24-25页 |
| 2.2.4 对照抗原的制备 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 表达菌液的测序鉴定 | 第26页 |
| 2.3.2 重组蛋白的诱导表达结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组朊蛋白纯化物SDS-PAGE的鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.3.4 重组朊蛋白纯化物Western blot鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 结论 | 第30-31页 |
| 第三章 牛朊蛋白单克隆抗体的初步制备 | 第31-49页 |
| 前言 | 第31-32页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 试验动物与细胞 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试验仪器及设备 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 试验所用溶液及配制 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 动物免疫 | 第33页 |
| 3.2.2 间接ELISA检测方法的建立 | 第33-34页 |
| 3.2.2.1 阳性与阴性血清的制备 | 第33页 |
| 3.2.2.2 抗原最佳包被浓度与血清最佳稀释度的确定 | 第33页 |
| 3.2.2.3 封闭液与血清与一抗、二抗作用时间的选择 | 第33-34页 |
| 3.2.2.4 间接ELISA检测被免疫小鼠的血清 | 第34页 |
| 3.2.3 Western blot检测方法的建立 | 第34页 |
| 3.2.3.1 脑匀浆制备 | 第34页 |
| 3.2.3.2 BAC蛋白法检测脑组织、SP2/0细胞的蛋白浓度 | 第34页 |
| 3.2.4 骨髓瘤细胞的复苏与培养 | 第34页 |
| 3.2.5 饲养层细胞的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.6 脾淋巴细胞的准备 | 第35页 |
| 3.2.7 细胞的融合 | 第35页 |
| 3.2.8 杂交瘤细胞的培养和筛选 | 第35-36页 |
| 3.2.9 杂交瘤细胞的冻存 | 第36页 |
| 3.2.10 杂交瘤细胞的复苏 | 第36页 |
| 3.2.11 Western blot检测杂交瘤细胞的特性 | 第36页 |
| 3.2.12 抗体Ig类及亚类的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.13 数据统计 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.3.1 最佳抗原及抗体工作浓度的确定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 封闭液的选择 | 第39页 |
| 3.3.3 抗原与待检血清和二抗的最佳作用时间 | 第39-40页 |
| 3.3.4 BCA法对脑组织的蛋白浓度测定 | 第40-41页 |
| 3.3.5 抗血清鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3.6 杂交瘤细胞系的建立及部分特性鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.3.6.1 骨髓瘤细胞(SP2/0)特异性检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6.2 杂交瘤细胞株的建立和分泌抗体稳定性 | 第44页 |
| 3.3.7 单抗生物学特性鉴定 | 第44页 |
| 3.3.8 Wester Blot检测杂交瘤细胞株特异性 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.5 结论 | 第47-48页 |
| 3.6 后续的研究工作 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| Abstract | 第55-56页 |
| 附录 | 第57页 |
