| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 PRV研究概况 | 第10-15页 |
| 1.1 PRV的生物学特征 | 第10-11页 |
| 1.2 PRV的复制 | 第11-12页 |
| 1.3 PRV基因组结构和功能 | 第12-15页 |
| 2 细菌人工染色体 | 第15-19页 |
| 2.1 细菌人工染色体的研究进展 | 第15-16页 |
| 2.2 细菌人工染色体在疱疹病毒上的应用 | 第16-18页 |
| 2.3 细菌人工染色体的修饰技术 | 第18-19页 |
| 3 PRV疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| 3.1 PRV传统疫苗 | 第19-20页 |
| 3.2 PRV基因缺失疫苗 | 第20页 |
| 3.3 以PRV为载体的重组疫苗 | 第20-21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 试验一 PRVFa株病毒转移载体的构建 | 第22-38页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1 病毒、菌种和细胞 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-33页 |
| 2.1 构建思路及技术路线 | 第24-25页 |
| 2.2 PRVFa中间转移载体同源臂的获得 | 第25-29页 |
| 2.3 中间转移载体pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB的构建 | 第29-30页 |
| 2.4 重组病毒中间转移载体pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5 重组病毒转移载体pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB-BAC的构建 | 第31-32页 |
| 2.6 重组病毒转移载体pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB-BAC的鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| 3.1 左、右同源臂FaTKA、FaTKB的PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 3.2 FaTKA、FaTKB单酶切结果 | 第34-35页 |
| 3.3 SphⅠ酶切鉴PRVFa左同源臂的PCR定点突变 | 第35页 |
| 3.4 pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5 pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 3.6 重组病毒转移载体pUC-FaTKAM-GFP-gpt-FaTKB-BAC的鉴定结果 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 试验二 PRVFa株基因组克隆为感染性细菌人工染色体 | 第38-44页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| 1.1 病毒、菌种和细胞 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第38页 |
| 1.4 主要仪器 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38-40页 |
| 2.1 重组病毒转移载体PRVFaTKAM-GFP-gpt-FaTKB-BAC的大量提取与纯化.. | 第38页 |
| 2.2 重组病毒转移载体质粒与PRVFa基因组共转染 | 第38-39页 |
| 2.3 重组病毒rPRV-Fa-BAC的初步筛选和纯化 | 第39页 |
| 2.4 重组病毒rPRV-Fa-BAC的鉴定 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-41页 |
| 3.1 重组病毒rPRV-Fa-BAC的获得 | 第40页 |
| 3.2 重组病毒rPRV-Fa-BAC的PCR检测结果 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 完整的病毒基因组是启动感染的关键 | 第41页 |
| 4.2 脂质体转染是获得重组病毒的关键 | 第41-42页 |
| 4.3 gpt加压筛选标记和GFP荧光筛选标记方便了重组病毒的获得 | 第42-44页 |
| 试验三 PRVFa株感染性BAC的获得及重组病毒的拯救 | 第44-52页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| 1.1 病毒、菌种和细胞 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第44页 |
| 1.4 主要仪器 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-48页 |
| 2.1 重组病毒环状DNA的提取 | 第44-45页 |
| 2.2 DH10B感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 2.3 环状DNA电转化DH10B感受态细胞 | 第45页 |
| 2.4 pPRV-BAC-Fa的筛选及鉴定 | 第45-46页 |
| 2.5 pPRV-BAC-Fa的大量提取 | 第46-47页 |
| 2.6 重组病毒vPRV-BAC-Fa的拯救 | 第47页 |
| 2.7 重组病毒vPRV-BAC-Fa的鉴定 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-50页 |
| 3.1 BamHⅠ酶切鉴定pPRV-BAC-Fa | 第48页 |
| 3.2 拯救的重组病毒vPRV-BAC-Fa的荧光病变图 | 第48-49页 |
| 3.3 重组病毒vPRV-BAC-Fa的鉴定 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 适时提取环状病毒基因组是重组病毒获得拯救的关键 | 第50页 |
| 4.2 环状病毒基因组的提取方法是获得阳性克隆的关键 | 第50页 |
| 4.3 环状基因组的纯度是获得阳性克隆的重要因素 | 第50页 |
| 4.4 电转化条件的优化是获得阳性克隆的必要条件 | 第50-52页 |
| 实验四 vPRV-BAC-Fa的体外生长特性研究 | 第52-56页 |
| 1 材料 | 第52页 |
| 1.1 病毒、菌种和细胞 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第52页 |
| 1.4 主要仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 vPRV-BAC-Fa、rPRV-Fa-BAC、PRVFaP8的病毒滴度测定 | 第52页 |
| 2.2 vPRV-BAC-Fa、rPRV-Fa-BAC、PRVFaP8的噬斑大小比较 | 第52页 |
| 2.3 vPRV-BAC-Fa、rPRV-Fa-BAC、PRVFaP8的体外生长曲线绘制 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-54页 |
| 3.1 vPRV-BAC-Fa、r PRV-Fa-BAC、PRV Fa P8 的病毒滴度测定 | 第53页 |
| 3.2 vPRV-BAC-Fa、r PRV-Fa-BAC、PRV Fa P8 的噬斑大小比较 | 第53-54页 |
| 3.3 vPRV-BAC-Fa、r PRV-Fa-BAC、PRV Fa P8 的生长曲线 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| Abstract | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第66页 |
