| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 英汉缩略语对照表 | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 PLK1激酶的概述 | 第10-11页 |
| 2 PLK1激酶的作用 | 第11-14页 |
| 3 PLK1抑制剂的现状 | 第14-15页 |
| 4 针对PLK1 PBD靶点的抑制剂 | 第15-19页 |
| 4.1 Plkl PBD的概述 | 第15-16页 |
| 4.2 针对Plk 1 PBD靶点的小分子抑制剂 | 第16-19页 |
| 第二章 细胞培养 | 第19-22页 |
| 1 实验材料 | 第19页 |
| 1.1 细胞株与培养基 | 第19页 |
| 1.2 仪器 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.2 细胞冻存 | 第19-20页 |
| 2.3 细胞计数 | 第20页 |
| 2.4 细胞传代 | 第20页 |
| 3 实验结果 | 第20-21页 |
| 4 讨论 | 第21页 |
| 5 小结 | 第21-22页 |
| 第三章 PLK1 PBD的原核表达与分离纯化 | 第22-35页 |
| 1 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.1 质粒、菌株 | 第22页 |
| 1.2 试剂 | 第22页 |
| 1.3 主要溶液 | 第22-24页 |
| 1.4 培养基 | 第24页 |
| 1.5 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.1 HeLa细胞总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2 RT-PCR进行cDNA合成 | 第25-26页 |
| 2.3 引物设计 | 第26页 |
| 2.4 PCR反应体系的建立 | 第26-27页 |
| 2.5 PCR反应产物的1.5%琼脂糖凝胶电泳检测 | 第27页 |
| 2.6 PCR产物的回收 | 第27页 |
| 2.7 pET28a-PlK1 PBD重组质粒的构建 | 第27页 |
| 2.8 PlK1 PBD重组蛋白的表达 | 第27-28页 |
| 2.9 PlK1 PBD重组蛋白的分离纯化 | 第28-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-33页 |
| 3.1 PlK1 PBD重组蛋白的分离纯化 | 第30-32页 |
| 3.2 重组蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第四章 化合物在荧光偏振模型上的筛选及IC_(50)值测定 | 第35-41页 |
| 1 实验材料 | 第35页 |
| 1.1 主要试剂 | 第35页 |
| 1.2 化合物 | 第35页 |
| 1.3 主要溶液 | 第35页 |
| 1.4 仪器 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-36页 |
| 2.1 样品库中化合物的稀释 | 第35页 |
| 2.2 荧光偏振模型上初筛化合物 | 第35页 |
| 2.3 初筛化合物在荧光偏振模型上IC_(50)值的测定 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-38页 |
| 3.1 荧光偏振模型上初筛化合物的结果 | 第36页 |
| 3.2 初筛化合物在荧关偏振模型上IC_(50)值的测定 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 4.1 药物筛选的现状 | 第38-39页 |
| 4.2 荧光偏振检测 | 第39-40页 |
| 5 小结 | 第40-41页 |
| 第五章 化合物6143D7的活性研究 | 第41-60页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| 1.1 主要试剂 | 第41页 |
| 1.2 主要溶液 | 第41页 |
| 1.3 仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-46页 |
| 2.1 6143D7对细胞的增殖抑制作用 | 第41-42页 |
| 2.2 流式细胞仪检测6143D7对HeLa细胞周期的影响 | 第42-44页 |
| 2.3 流式细胞仪检测6143D7对HeLa细胞凋亡的影响结果 | 第44页 |
| 2.4 6143D7对HeLa细胞迁移作用(划痕)的影响 | 第44-45页 |
| 2.5 6143D7与PlK1激酶PBD结构域的分子对接 | 第45-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-56页 |
| 3.1 6143D7对细胞的增殖抑制作用结果 | 第46-47页 |
| 3.2 流式细胞仪检测6143D7对HeLa细胞周期影响的结果 | 第47-52页 |
| 3.3 流式细胞仪检测6143D7对HeLa细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 6143D7对HeLa细胞迁移作用(划痕)的结果 | 第53-55页 |
| 3.5 6143D7与PlK1激酶PBD结构域分子对接的结果 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 MTT法检测6143D7对肿瘤细胞增殖的抑制作用 | 第56页 |
| 4.2 细胞周期的检测 | 第56-57页 |
| 4.3 细胞凋亡的检测 | 第57页 |
| 4.4 细胞迁移作用(划痕)的检测 | 第57-58页 |
| 4.5 分子虚拟对接 | 第58页 |
| 5 小结 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第68-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
