| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 植物体细胞胚发生 | 第10页 |
| 1.2 牡丹体细胞胚研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 牡丹组织培养研究概述 | 第10-11页 |
| 1.2.2 牡丹愈伤组织诱导研究进展 | 第11页 |
| 1.2.3 牡丹体胚发生研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 体细胞胚发生分子生物学研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 SERK基因研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4.1 SERK基因研究概述 | 第13-14页 |
| 1.4.2 牡丹Ps SERK基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 植物遗传转化技术的应用 | 第15-17页 |
| 1.5.1 植物遗传转化概述 | 第15页 |
| 1.5.2 植物遗传转化表达载体研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5.3 植物遗传转化途径与方法 | 第16页 |
| 1.5.4 农杆菌介导的植物遗传转化 | 第16-17页 |
| 1.6 拟南芥转基因方法研究进展 | 第17-18页 |
| 1.7 问题与展望 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-34页 |
| 3.1 试验材料 | 第21-24页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第21-22页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第22页 |
| 3.1.3 试验试剂 | 第22-23页 |
| 3.1.4 药品的配制 | 第23页 |
| 3.1.5 细菌培养基的配制 | 第23-24页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-34页 |
| 3.2.1 试验材料的前期处理 | 第24-25页 |
| 3.2.1.1 拟南芥的种植 | 第24-25页 |
| 3.2.1.2 愈伤组织的诱导培养 | 第25页 |
| 3.2.1.3 愈伤组织的继代培养 | 第25页 |
| 3.2.2 牡丹Ps SERK基因全长的PCR扩增 | 第25页 |
| 3.2.3 Ps SERK过表达载体的构建 | 第25-29页 |
| 3.2.3.1 载体构建实验方案的确定 | 第25-26页 |
| 3.2.3.2 引物的设计 | 第26-27页 |
| 3.2.3.3 Ps SERK基因ORF序列的PCR扩增 | 第27页 |
| 3.2.3.4 质粒DNA的提取与检测 | 第27-28页 |
| 3.2.3.5 p CAMBIA1301-35S-NOS中间克隆载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.3.6 Ps SERK过表达载体的构建 | 第29页 |
| 3.2.4 Ps SERK过表达载体质粒转化农杆菌 | 第29-30页 |
| 3.2.4.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 3.2.4.2 质粒DNA转化农杆菌 | 第29-30页 |
| 3.2.4.3 已转化农杆菌的检测 | 第30页 |
| 3.2.5 农杆菌花序侵染法转化拟南芥 | 第30-31页 |
| 3.2.5.1 花序侵染法转化拟南芥 | 第30-31页 |
| 3.2.5.2 拟南芥的潮霉素敏感性测试 | 第31页 |
| 3.2.5.3 转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第31页 |
| 3.2.6 农杆菌介导的牡丹愈伤组织遗传转化 | 第31-34页 |
| 3.2.6.1 农杆菌的活化培养 | 第31-32页 |
| 3.2.6.2 摇菌培养 | 第32页 |
| 3.2.6.3 侵染及共培养 | 第32页 |
| 3.2.6.4 除菌和筛选培养 | 第32页 |
| 3.2.6.5 GUS基因组织化学染色 | 第32-34页 |
| 4 试验结果与分析 | 第34-48页 |
| 4.1 牡丹Ps SERK基因全长的PCR扩增 | 第34-36页 |
| 4.1.1 牡丹愈伤组织总RNA纯度及浓度的检测 | 第34页 |
| 4.1.2 牡丹Ps SERK基因全长的PCR扩增 | 第34页 |
| 4.1.3 扩增产物的回收、连接与转化 | 第34-36页 |
| 4.2 Ps SERK基因过表达载体的构建 | 第36-42页 |
| 4.2.1 Ps SERK基因ORF序列的PCR扩增 | 第36-38页 |
| 4.2.2 质粒DNA纯度及浓度的检测 | 第38-39页 |
| 4.2.3 p CAMBIA1301-35S-NOS中间克隆载体的构建 | 第39-41页 |
| 4.2.4 Ps SERK过表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 4.3 Ps SERK过表达载体质粒转化农杆菌 | 第42-43页 |
| 4.4 农杆菌介导转化拟南芥 | 第43-46页 |
| 4.4.1 拟南芥的潮霉素敏感性测试 | 第43-44页 |
| 4.4.2 转基因拟南芥的筛选 | 第44-45页 |
| 4.4.3 转基因拟南芥的PCR验证 | 第45-46页 |
| 4.4.4 转基因拟南芥的表型观察与比较 | 第46页 |
| 4.5 农杆菌介导的牡丹愈伤组织遗传转化 | 第46-48页 |
| 5 结论与讨论 | 第48-52页 |
| 5.1 表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 5.2 Ps SERK基因功能的分析 | 第49页 |
| 5.3 菌株类型对遗传转化的影响 | 第49-50页 |
| 5.4 抗生素浓度在遗传转化中的应用 | 第50-51页 |
| 5.5 牡丹Ps SERK基因在功能验证上需要进一步探讨的问题 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| ABSTRACT | 第60-61页 |
| 附图 | 第62-63页 |
