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家蚕二分浓核病毒结构蛋白与潜在受体蛋白的互作研究

摘要第5-7页
Abstract第7-9页
第一章 绪论第13-22页
    1.1 家蚕二分浓核病毒研究概况第13-14页
        1.1.1 家蚕二分浓核病毒第13页
        1.1.2 家蚕二分浓核病毒主要结构蛋白VP第13-14页
        1.1.3 家蚕二分浓核病毒次要结构蛋白 P133第14页
    1.2 家蚕对家蚕二分浓核病毒的抵抗性研究第14-17页
        1.2.1 家蚕对家蚕二分浓核病毒的抗性第14-15页
        1.2.2 敏感性基因+~(nsd-2)的国内外研究进展第15-16页
        1.2.3 家蚕细胞株的研究第16-17页
    1.3 病毒蛋白与细胞受体相互作用研究第17-18页
        1.3.1 病毒蛋白与细胞受体的结合机制第17页
        1.3.2 蛋白质相互作用的研究方法第17-18页
        1.3.3 病毒蛋白与细胞受体相互作用的研究前景第18页
    1.4 立题依据及意义第18-19页
    1.5 主要研究内容和技术路线第19-22页
        1.5.1 研究内容第19-21页
        1.5.2 技术路线第21-22页
第二章 稳定表达潜在受体蛋白NSD-2细胞株的建立第22-42页
    2.1 材料和试剂第22-25页
        2.1.1 菌株和细胞系第22页
        2.1.2 主要试剂和溶液的配制第22-24页
        2.1.3 主要实验仪器设备第24-25页
    2.2 实验方法第25-35页
        2.2.1 稳定表达+~(nsd-2)基因质粒的构建第25-28页
        2.2.2 BmN细胞的培养、转染和筛选第28-30页
        2.2.3 稳转细胞的RT-PCR检测第30-32页
        2.2.4 稳转细胞的westernblot检测第32-34页
        2.2.5 稳转细胞的免疫荧光检测第34-35页
    2.3 结果及分析第35-40页
        2.3.1 敏感性基因+~(nsd-2)瞬时表达质粒的鉴定第35-36页
        2.3.2 稳转细胞株BmN(+~(nsd-2))细胞的形态观察第36-38页
        2.3.3 BmN(+~(nsd-2))细胞中+~(nsd-2)基因的转录第38页
        2.3.4 BmN(+~(nsd-2))细胞中NSD-2蛋白的表达第38-39页
        2.3.5 BmN(+~(nsd-2))细胞中NSD-2蛋白的定位分析第39-40页
    2.4 讨论与小结第40-42页
第三章 结构蛋白表达质粒构建第42-64页
    3.1 材料和试剂第42-44页
        3.1.1 质粒、菌株及细胞系第42页
        3.1.2 主要试剂和溶液的配制第42-43页
        3.1.3 主要实验仪器设备第43-44页
    3.2 实验方法第44-54页
        3.2.1 vp和p133基因原核表达质粒的构建第44页
        3.2.2 单克隆抗体的制备第44页
        3.2.3 vp和p133基因真核表达质粒的构建及鉴定第44-51页
        3.2.4 vp基因截短片段表达质粒的构建及鉴定第51-54页
    3.3 结果及分析第54-62页
        3.3.1 vp基因及p133基因真核表达质粒第54-57页
        3.3.2 BmN(+~(nsd-2))细胞中表达VP蛋白和P133蛋白第57-59页
        3.3.3 vp基因截短片段表达质粒和蛋白表达第59-62页
    3.4 讨论与小结第62-64页
第四章 病毒主要结构蛋白VP与NSD-2蛋白的相互作用第64-70页
    4.1 材料与试剂第64-65页
        4.1.1 实验材料第64页
        4.1.2 主要试剂和溶液的配制第64页
        4.1.3 主要实验仪器设备第64-65页
    4.2 实验方法第65-66页
        4.2.1 免疫共沉淀相互作用分析第65-66页
        4.2.2 免疫荧光分析第66页
    4.3 结果及分析第66-68页
        4.3.1 VP蛋白及NSD-2表达鉴定第66-67页
        4.3.2 VP与NSD-2蛋白间相互作用分析第67-68页
    4.4 讨论与小结第68-70页
第五章 BmBDV对稳转细胞株BmN(+~(nsd-2))的侵染性第70-78页
    5.1 材料和试剂第70页
        5.1.1 细胞系第70页
        5.1.2 主要试剂和溶液的配制第70页
        5.1.3 主要实验仪器设备第70页
    5.2 实验方法第70-73页
        5.2.1 BmBDV侵染BmN(+~(nsd-2))细胞第70-72页
        5.2.2 BmBDV侵染BmN(+~(nsd-2))细胞的免疫荧光检测第72页
        5.2.3 BmBDV侵染BmN(+~(nsd-2))细胞的qRT-PCR检测第72-73页
    5.3 结果及分析第73-76页
        5.3.1 BmBDV病毒悬液提取后vp基因的检测第73-74页
        5.3.2 BmBDV侵染BmN(+~(nsd-2))细胞后VP蛋白的表达第74-75页
        5.3.3 BmBDV侵染BmN(+~(nsd-2))细胞后vp和ns1基因的转录第75-76页
    5.4 讨论与小结第76-78页
第六章 总结与展望第78-81页
    6.1 主要总结第78-79页
    6.2 工作展望第79-81页
参考文献第81-88页
致谢第88-90页
硕士期间发表的论文第90页
参与的研究项目第90页

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