| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 microRNA概述 | 第13-22页 |
| 1.1.1 microRNA的生物合成、加工与表达 | 第13-16页 |
| 1.1.2 microRNA调控基因表达的机理 | 第16-17页 |
| 1.1.3 microRNA的功能 | 第17-22页 |
| 1.2 microRNA-7研究概述 | 第22-27页 |
| 1.2.1 microRNA-7的表达 | 第22-24页 |
| 1.2.2 microRNA-7与胰脏 | 第24页 |
| 1.2.3 microRNA-7与大脑 | 第24-25页 |
| 1.2.4 microRNA-7与糖尿病 | 第25-26页 |
| 1.2.5 microRNA-7与癌症 | 第26-27页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9在基因编辑中的研究概述 | 第27-33页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas系统概述 | 第27-28页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas系统基本工作原理与特点 | 第28-30页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9中sgRNA打靶位点的选择 | 第30-32页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9在基因组编辑中的应用与展望 | 第32-33页 |
| 1.4 研究意义与目的 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第34-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第34页 |
| 2.1.2 CRISPR/Cas9基因编辑体外转录质粒 | 第34页 |
| 2.1.3 主要引物 | 第34-37页 |
| 2.2 主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| 2.3 主要试剂 | 第38-40页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第38页 |
| 2.3.2 体外转录 | 第38页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR及普通PCR | 第38-39页 |
| 2.3.4 胚胎体外培养及显微注射操作 | 第39页 |
| 2.3.5 原位杂交及组织学染色 | 第39页 |
| 2.3.6 动物实验 | 第39-40页 |
| 2.4 主要溶液的配制 | 第40-45页 |
| 2.4.1 质粒构建 | 第40-41页 |
| 2.4.2 原位杂交及组织学染色 | 第41-44页 |
| 2.4.3 实时荧光定量PCR及普通PCR | 第44-45页 |
| 2.4.4 胚胎体外培养及显微注射操作 | 第45页 |
| 2.4.5 动物实验 | 第45页 |
| 2.5 实验方法 | 第45-67页 |
| 2.5.1 动物处理和组织采样 | 第45-46页 |
| 2.5.2 动物组织中总RNA提取 | 第46-47页 |
| 2.5.3 普通mRNA的反转录 | 第47-48页 |
| 2.5.4 microRNA的反转录 | 第48-49页 |
| 2.5.5 实时定量PCR (Real-time PCR) | 第49-50页 |
| 2.5.6 小鼠基因组DNA的粗提取 | 第50页 |
| 2.5.7 小鼠基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.5.8 试剂盒小量提取质粒 | 第51-52页 |
| 2.5.9 PCR产物和酶切产物的回收纯化 | 第52页 |
| 2.5.10 琼脂糖凝胶PCR产物回收纯化 | 第52-53页 |
| 2.5.11 CRISPR/Cas9 SgRNA识别位点设计与产生 | 第53-54页 |
| 2.5.12 DNA连接 | 第54-55页 |
| 2.5.13 连接产物的转化及阳性克隆菌落的鉴定 | 第55页 |
| 2.5.14 体外转录 | 第55-57页 |
| 2.5.15 T7EI核酸内切酶(T7 Endonuclease Ⅰ)法检测基因突变 | 第57-58页 |
| 2.5.16 小鼠受精卵显微注射及胚胎移植 | 第58-61页 |
| 2.5.17 原位杂交 | 第61-63页 |
| 2.5.18 HE染色 | 第63-64页 |
| 2.5.19 组织免疫荧光染色 | 第64页 |
| 2.5.20 小鼠生长发育曲线绘制 | 第64-65页 |
| 2.5.21 小鼠主要器官重的统计 | 第65页 |
| 2.5.22 小鼠配种实验 | 第65页 |
| 2.5.23 雄性小鼠附睾尾精子数量统计 | 第65页 |
| 2.5.24 雄性小鼠精子运动能力测定 | 第65-66页 |
| 2.5.25 数据分析 | 第66-67页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第67-103页 |
| 3.1 microRNA-7表达水平的检测 | 第67-72页 |
| 3.1.1 microRNA-7在小鼠各组织器官中表达水平的检测 | 第67-69页 |
| 3.1.2 microRNA-7在成年小鼠睾丸中的表达 | 第69页 |
| 3.1.3 microRNA-7在小鼠睾丸发育过程中的表达 | 第69-72页 |
| 3.2 microRNA-7全身性敲除小鼠模型的建立 | 第72-80页 |
| 3.2.1 sgRNA打靶位点序列的设计与制备 | 第72-75页 |
| 3.2.2 显微注射构建基因敲除小鼠 | 第75-76页 |
| 3.2.3 microRNA-7基因编辑小鼠的鉴定 | 第76页 |
| 3.2.4 microRNA-7基因敲除小鼠扩繁及敲除效率的检测 | 第76-79页 |
| 3.2.5 microRNA-7基因敲除小鼠脱靶效应的检测 | 第79-80页 |
| 3.3 microRNA-7基因缺失小鼠表型观察 | 第80-94页 |
| 3.3.1 microRNA-7基因缺失小鼠生长发育的情况 | 第80-85页 |
| 3.3.2 microRNA-7基因缺失对小鼠生殖能力的影响 | 第85-87页 |
| 3.3.3 microRNA-7a2基因缺失对小鼠睾丸发育的影响 | 第87-89页 |
| 3.3.4 microRNA-7a2基因缺失对小鼠附睾组织的影响 | 第89页 |
| 3.3.5 microRNA-7a2基因缺失对小鼠精子活力的影响 | 第89-93页 |
| 3.3.6 microRNA-7a2基因缺失对雄小鼠促性腺激素分泌的影响 | 第93-94页 |
| 3.4 microRNA-7a2~(flox/flox)转基因小鼠的构建 | 第94-99页 |
| 3.4.1 sgRNA打靶位点、同源臂的设计与制备 | 第94-95页 |
| 3.4.2 microRNA-7a2~(flox/flox)转基因小鼠的鉴定 | 第95-99页 |
| 3.5 结果分析与讨论 | 第99-103页 |
| 第四章 结论与展望 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 附录 | 第117-118页 |
| 作者简介 | 第118页 |
