| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-21页 |
| 1.1 前言 | 第15页 |
| 1.2 水稻分蘖性状遗传 | 第15-16页 |
| 1.2.1 水稻分蘖的遗传控制因素 | 第15-16页 |
| 1.2.2 水稻分蘖的QTL定位 | 第16页 |
| 1.3 水稻分蘖发生的分子机制 | 第16-18页 |
| 1.3.1 水稻分蘖的发生 | 第16页 |
| 1.3.2 水稻少蘖基因 | 第16-17页 |
| 1.3.3 水稻多蘖基因 | 第17-18页 |
| 1.4 雷帕霉素靶点的信号转导途径 | 第18-20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 水稻少蘖突变体ft2的形态学分析 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 植株种植条件 | 第21-22页 |
| 2.2.2 拟南芥基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 T-DNA插入纯合体鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.5 cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.6 Real-timeqPCR检测基因表达水平 | 第25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-27页 |
| 2.3.1 水稻少分蘖突变体ft2形态学分析 | 第25-26页 |
| 2.3.2 拟南芥Atft2T-DNA突变体的形态学分析 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第27-29页 |
| 第三章 水稻少蘖突变体ft2的图位克隆和RNA干涉验证 | 第29-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第29页 |
| 3.1.1 材料 | 第29页 |
| 3.1.2 试剂 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 3.2.1 水稻基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 3.2.2 标记开发与引物设计 | 第30页 |
| 3.2.3 基因定位方法 | 第30页 |
| 3.2.4 候选基因的测序及确定 | 第30页 |
| 3.2.5 RNA干涉质粒的构建及水稻转化 | 第30-35页 |
| 3.2.5.1 目的片段的扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.5.2 目的片段的回收与纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.5.3 加A尾反应 | 第32页 |
| 3.2.5.4 连接中间载体T5Zero | 第32页 |
| 3.2.5.5 大肠杆菌(E.coli)感受态DH5α的转化 | 第32-33页 |
| 3.2.5.6 大肠杆菌质粒DNA的提取及鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.5.7 酶切检测质粒DNA | 第34页 |
| 3.2.5.8 终载pTCK303的连接 | 第34-35页 |
| 3.2.5.9 重组质粒的筛选 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-38页 |
| 3.3.1 FT2基因的初定位与克隆 | 第35-37页 |
| 3.3.2 野生型与突变体中FT2的相对表达水平 | 第37-38页 |
| 3.3.3 FT2基因的RNA干涉实验 | 第38页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第38-41页 |
| 第四章 FT2的生物信息学分析 | 第41-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.2 试剂 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-46页 |
| 4.2.1 FT2的进化树分析 | 第41页 |
| 4.2.2 FT2蛋白序列二级结构分析 | 第41-42页 |
| 4.2.3 FT2的理化性质分析 | 第42页 |
| 4.2.4 水稻组织总RNA的提取 | 第42页 |
| 4.2.5 水稻总蛋白的提取 | 第42-43页 |
| 4.2.6 蛋白质免疫印迹 | 第43-44页 |
| 4.2.7 水稻FT2基因过表达载体的构建 | 第44页 |
| 4.2.8 过表达载体质粒DNA的大量提取 | 第44-45页 |
| 4.2.9 水稻原生质体的制备 | 第45-46页 |
| 4.2.10 水稻原生质体的转化 | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-51页 |
| 4.3.1 进化树分析 | 第46-47页 |
| 4.3.2 FT2蛋白的二级结构和保守性分析 | 第47-48页 |
| 4.3.3 FT2的理化性质分析 | 第48-49页 |
| 4.3.4 FT2的跨膜结构域分析和蛋白亚细胞定位预测 | 第49-50页 |
| 4.3.5 FT2基因的表达模式分析 | 第50-51页 |
| 4.3.6 FT2的亚细胞定位 | 第51页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第51-53页 |
| 第五章 FT2的基因功能研究与分析 | 第53-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第53页 |
| 5.1.1 材料 | 第53页 |
| 5.1.2 试剂 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-60页 |
| 5.2.1 FT2的蛋白原核表达及纯化 | 第53-54页 |
| 5.2.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及考马斯亮蓝染色 | 第54-55页 |
| 5.2.3 酵母双杂交实验 | 第55-57页 |
| 5.2.3.1 酵母(AH109)感受态细胞的制备： | 第55页 |
| 5.2.3.2 酵母感受态细胞的转化 | 第55-56页 |
| 5.2.3.3 酵母质粒DNA的提取及鉴定 | 第56-57页 |
| 5.2.3.4 酵母质粒的鉴定： | 第57页 |
| 5.2.3.5 蛋白互作验证 | 第57页 |
| 5.2.4 双分子荧光素酶互补成像实验 | 第57-59页 |
| 5.2.4.1 载体的构建 | 第57-58页 |
| 5.2.4.2 农杆菌感受态的制作 | 第58页 |
| 5.2.4.3 冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第58页 |
| 5.2.4.4 农杆菌介导的烟草瞬时转化表达 | 第58-59页 |
| 5.2.4.5 CCD成像及LUC活性检测 | 第59页 |
| 5.2.5 雷帕霉素敏感性检测 | 第59-60页 |
| 5.2.5.1 水稻野生型SH与ft2突变体的雷帕霉素敏感性检测 | 第59-60页 |
| 5.2.5.2 拟南芥野生型Col与Atft2突变体的雷帕霉素敏感性检测 | 第60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-67页 |
| 5.3.1 FT2蛋白的原核表达及纯化 | 第60-61页 |
| 5.3.2 酵母双杂交实验验证FT2与TOR的互作 | 第61-63页 |
| 5.3.3 双分子荧光素酶互补成像实验 | 第63-65页 |
| 5.3.4 水稻野生型和ft2突变体对雷帕霉素的敏感性检测 | 第65-66页 |
| 5.3.5 拟南芥野生型Col与突变体Atft2对雷帕霉素的敏感性比较 | 第66-67页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第67-69页 |
| 第六章 总结和展望 | 第69-71页 |
| 6.1 工作总结 | 第69-70页 |
| 6.2 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
