| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 冬虫夏草研究概况 | 第9-12页 |
| 1.1.1 分类地位 | 第9页 |
| 1.1.2 地理分布 | 第9页 |
| 1.1.3 冬虫夏草的形态研究 | 第9-10页 |
| 1.1.4 冬虫夏草的生活史 | 第10页 |
| 1.1.5 冬虫夏草的药理作用 | 第10-11页 |
| 1.1.6 冬虫夏草无性型的确定 | 第11页 |
| 1.1.7 中国被毛孢及冬虫夏草相关真菌的开发应用 | 第11-12页 |
| 1.1.8 冬虫夏草微生态区系中真菌多样性 | 第12页 |
| 1.2 微生物多样性的研究方法 | 第12-13页 |
| 1.3 次生代谢产物 | 第13-17页 |
| 1.3.1 聚酮合成酶 | 第14-16页 |
| 1.3.2 非核糖体多肽合成酶 | 第16-17页 |
| 1.4 研究的目的、内容与意义 | 第17-18页 |
| 1.4.1 研究的目的及意义 | 第17页 |
| 1.4.2 研究方案 | 第17-18页 |
| 1.5 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 高通量测序分析冬虫夏草真菌多样性 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验设计 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.4 试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 DNA提取试剂盒 | 第21-22页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 总DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 高通量测序 | 第23-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-32页 |
| 2.3.1 测序数据统计 | 第25-26页 |
| 2.3.2 OTU聚类、注释及多样性分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 稀释曲线 | 第27-28页 |
| 2.3.4 群落结构组分分析 | 第28-31页 |
| 2.3.5 Heatmap热图分析 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 冬虫夏草周围环境可培养真菌分离及初步鉴定 | 第34-47页 |
| 3.1 材料 | 第34-36页 |
| 3.1.1 样品来源 | 第34页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.3 试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.4 溶液与培养基配制 | 第35-36页 |
| 3.2 方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 样品处理 | 第36页 |
| 3.2.2 真菌分离 | 第36-37页 |
| 3.2.3 菌株的初步分类 | 第37页 |
| 3.2.4 菌株保存方法 | 第37页 |
| 3.2.5 基因组DNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.6 ITS序列的扩增及测序 | 第38页 |
| 3.2.7 序列分析 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 分离菌株的形态 | 第39页 |
| 3.3.2 PCR扩增结果 | 第39-40页 |
| 3.3.3 BLASTn比对结果 | 第40-43页 |
| 3.3.4 冬虫夏草微生态区系真菌的种类 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-47页 |
| 第四章 冬虫夏草可培养真菌PKS和NRPS基因的多样性 | 第47-65页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 筛选菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第48页 |
| 4.1.3 试剂 | 第48页 |
| 4.1.4 溶液配制和培养基 | 第48-49页 |
| 4.2 方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 PKS基因检测 | 第49-50页 |
| 4.2.2 NRPS基因检测 | 第50页 |
| 4.2.3 PCR产物的胶回收纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.4 连接 | 第51页 |
| 4.2.5 感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 4.2.6 转化 | 第51-52页 |
| 4.2.7 阳性克隆的PCR鉴定 | 第52页 |
| 4.2.8 测序及系统发育树分析 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-63页 |
| 4.3.1 PKS基因的扩增 | 第53-58页 |
| 4.3.2 NRPS基因的扩增 | 第58-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第65-68页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 研究展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-79页 |
| 附录1 冬虫夏草微生态区系真菌的PKS基因KS结构域序列 | 第79-88页 |
| 附录2 冬虫夏草微生态区系真菌的NRPS基因A结构域序列 | 第88-101页 |
| 硕士研究生期间发表文章和获奖情况 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
