| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 杨树的研究背景及研究进展 | 第11页 |
| 1.1.1 杨树的生物学特征及利用价值 | 第11页 |
| 1.1.2 杨树的研究现状 | 第11页 |
| 1.2 植物维管的发育及调控机理 | 第11-18页 |
| 1.2.1 植物的初生生长 | 第11-12页 |
| 1.2.2 植物的次生发育 | 第12-13页 |
| 1.2.3 植物木材发育的调控机理 | 第13-15页 |
| 1.2.4 形成层的转录调控网络 | 第15-17页 |
| 1.2.5 激素对形成层的调控 | 第17-18页 |
| 1.3 生长素及其重要生物学功能 | 第18-23页 |
| 1.3.1 生长素信号通路 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Aux/IAA转录抑制子的生物学功能 | 第19-20页 |
| 1.3.3 ARF转录因子 | 第20-23页 |
| 第2章 引言 | 第23-27页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第23页 |
| 2.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 2.2.1 杨树参与木质部形成的Aux/IAA候选基因的筛选 | 第23页 |
| 2.2.2 目的基因片段的扩增及获得 | 第23页 |
| 2.2.3 IAA9表达部位分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4 IAA9转录活性分析 | 第24页 |
| 2.2.5 IAA9过表达及Cas9敲除株系的获得 | 第24页 |
| 2.2.6 IAA9对杨树木质部发育的调控 | 第24页 |
| 2.2.7 IAA9调控木材发育的分子机制 | 第24页 |
| 2.2.8 IAA9与ARF的作用机制 | 第24页 |
| 2.2.9 IAA9-ARF下游靶基因筛选 | 第24-25页 |
| 2.3 研究目标 | 第25页 |
| 2.4 技术路线 | 第25-27页 |
| 第3章 实验材料与方法 | 第27-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.1 实验所需的植物材料 | 第27页 |
| 3.1.2 菌种和质粒 | 第27页 |
| 3.2 实验试剂 | 第27-30页 |
| 3.2.1 实验试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
| 3.2.2 激素和抗生素 | 第28页 |
| 3.2.3 植物培养基及细菌真菌培养基 | 第28-29页 |
| 3.2.4 质粒提取试剂(自配) | 第29页 |
| 3.2.5 其它试剂 | 第29-30页 |
| 3.3 仪器设备 | 第30-32页 |
| 3.4 实验方法 | 第32-57页 |
| 3.4.1 进化分析 | 第32页 |
| 3.4.2 引物设计 | 第32-35页 |
| 3.4.3 植物表达载体构建 | 第35-41页 |
| 3.4.4 荧光定量 | 第41-42页 |
| 3.4.5 酵母表达载体构建及转化 | 第42-43页 |
| 3.4.6 毛白杨的遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.4.7 转基因杨树的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.8 烟草瞬时转化 | 第45页 |
| 3.4.9 生长素诱导的转录水平及蛋白水平检测 | 第45页 |
| 3.4.10 GUS酶活定量分析 | 第45-46页 |
| 3.4.11 启动子GUS染色 | 第46页 |
| 3.4.12 转基因杨树的形态解剖学观察 | 第46页 |
| 3.4.13 原位杂交 | 第46-57页 |
| 第4章 实验结果与分析 | 第57-89页 |
| 4.1 Aux/IAA转录因子的生物信息学分析 | 第57-59页 |
| 4.1.1 杨树Aux/IAA进化树分析 | 第57页 |
| 4.1.2 毛果杨Aux/IAA表达部位分析 | 第57-59页 |
| 4.2 杨树IAA9组织特异性分析 | 第59-62页 |
| 4.2.1 IAA9表达部位分析 | 第59-60页 |
| 4.2.2 IAA9启动子分析 | 第60-61页 |
| 4.2.3 IAA9茎中表达部位分析 | 第61-62页 |
| 4.3 IAA9是典型的Aux/IAA蛋白 | 第62-67页 |
| 4.3.1 IAA9氨基酸序列分析 | 第62-63页 |
| 4.3.2 IAA9亚细胞定位分析 | 第63-64页 |
| 4.3.3 酵母自激活分析 | 第64-65页 |
| 4.3.4 IAA9生长素诱导的转录水平分析 | 第65页 |
| 4.3.5 IAA9生长素诱导的蛋白水平分析 | 第65-67页 |
| 4.4 构建转基因杨树 | 第67-69页 |
| 4.5 IAA9m过表达植株形态学观察 | 第69-72页 |
| 4.6 IAA9m-OE转基因植株次生壁合成相关基因表达分析 | 第72-73页 |
| 4.7 利用CRISPR-Cas9技术构建IAA9敲除株系 | 第73-75页 |
| 4.8 IAA9与ARF5转录因子相互作用 | 第75-77页 |
| 4.9 ARF5.1恢复IAA9m表型 | 第77-84页 |
| 4.9.1 ARF5.1Δ转录活性及相互作用分析 | 第77-79页 |
| 4.9.2 ARF5.1全长及截短转基因杨树筛选 | 第79-81页 |
| 4.9.3 ARF5.1过表达恢复IAA9m-OE表型 | 第81-84页 |
| 4.10 ARF5.1过表达植株次生壁合成相关基因表达量分析 | 第84页 |
| 4.11 IAA9m-ARF5.1共同调控HB7、HB8表达 | 第84-86页 |
| 4.11.1 转基因植株HB7、HB8基因表达量检测 | 第84-85页 |
| 4.11.2 生长素诱导HB7和HB8表达 | 第85-86页 |
| 4.12 ARF5.1结合HB7和HB8启动子 | 第86-89页 |
| 第5章 讨论 | 第89-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录 | 第103-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 攻读硕士学位期间的科研成果 | 第109页 |
