| 摘要 | 第8-10页 |
| 中英文及缩写对照表 (Abbreviation Index ) | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 脂肪的形成 | 第11-13页 |
| 1.1 脂肪的发生过程 | 第11-12页 |
| 1.2 脂肪细胞的组织学判定标准 | 第12-13页 |
| 2 MiRNA的研究进展 | 第13-16页 |
| 2.1 MiRNA的发现 | 第13页 |
| 2.2 MiRNA的结构特点与合成 | 第13-14页 |
| 2.3 MiRNA的调控机制 | 第14页 |
| 2.4 MiRNA对于脂肪代谢的调控作用 | 第14-16页 |
| 2.5 MiRNA靶基因的预测和验证 | 第16页 |
| 2.6 MiRNA的研究展望 | 第16页 |
| 3 研究目的意义 | 第16-18页 |
| 参考文献 | 第18-23页 |
| 第二章 MiR-299a-3p的靶基因预测及生物信息学分析 | 第23-34页 |
| 1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 1.2 试验仪器及耗材 | 第24页 |
| 1.2.1 试验用到的主要仪器设备 | 第24页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 试验方法 | 第24-26页 |
| 1.3.1 绵羊尾部脂肪组织RNA提取及质量鉴定 | 第24-25页 |
| 1.3.2 MiRNA反转录与定量引物的设计基本步骤 | 第25页 |
| 1.3.3 MiR-299a-3p荧光定量PCR引物设计 | 第25页 |
| 1.3.4 反转录 | 第25-26页 |
| 1.3.5 荧光定量PCR测定mRNA水平表达量 | 第26页 |
| 1.4 数据处理 | 第26-27页 |
| 1.5 MiR-299a-3p的靶基因预测 | 第27页 |
| 1.5.1 利用miRanda的靶基因预测 | 第27页 |
| 1.5.2 利用TargetScan的靶基因预测 | 第27页 |
| 1.5.3 利用DIANA-microT的靶基因预测 | 第27页 |
| 1.6 MiR-299a-3p预测靶基因的结果分析和KEGG通路分析 | 第27-28页 |
| 1.7 MiR-299a-3p和及潜在靶基因的序列保守性分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.1 总RNA提取质量及引物特异性 | 第28页 |
| 2.2 miR-299a-3p在不同品种绵羊尾脂中的表达 | 第28页 |
| 2.3 不同靶基因预测软件预测下miR-299a-3p的靶基因 | 第28-29页 |
| 2.4 MiR-299a-3p靶基因预测结果KEGG通路分析 | 第29页 |
| 2.5 MiR-299a-3p序列保守性及与UCP2结合位点分析 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 3.1 MiR-299a-3p在不同脂尾型绵羊尾部脂肪组织差异表达 | 第30页 |
| 3.2 在线靶基因预测软件结果分析 | 第30-31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-34页 |
| 第三章 MiR-299a-3p及UCP2在绵羊前脂肪细胞分化过程的时序表达 | 第34-40页 |
| 1 试验材料与方法 | 第34-37页 |
| 1.1 试验材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 绵羊前体脂肪细胞培养所用试剂与耗材 | 第34-35页 |
| 1.1.2 总蛋白提取及蛋白免疫印迹技术所用试剂和耗材 | 第35页 |
| 1.2 试验方法 | 第35-37页 |
| 1.2.1 绵羊前脂肪细胞的分离获得与培养 | 第35-36页 |
| 1.2.2 绵羊前体脂肪细胞的诱导分化及油红O染色鉴定 | 第36页 |
| 1.2.3 TRIzol法提取总RNA | 第36页 |
| 1.2.4 反转录以及荧光定量PCR | 第36-37页 |
| 1.3 数据处理 | 第37页 |
| 2 试验结果 | 第37-38页 |
| 2.1 绵羊前体脂肪细胞的分化及油红O染色鉴定 | 第37页 |
| 2.2 绵羊前体脂肪细胞分化过程中miR-299a-3p和UCP2的表达量变化 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38页 |
| 4 小结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-40页 |
| 第四章 MiR-299a-3p对UCP2基因表达的影响 | 第40-57页 |
| 1 材料和方法 | 第40-49页 |
| 1.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 1.1.1 试验仪器、试剂及耗材 | 第40-41页 |
| 1.2 试验方法 | 第41-49页 |
| 1.2.1 miR-299a-3p过表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 1.2.2 UCP2基因3'-UTR区荧光报告载体的构建 | 第44-45页 |
| 1.2.3 HEK293T细胞的培养 | 第45-46页 |
| 1.2.4 MiR-299a-3p过表达载体以及NC载体转染绵羊前脂肪细胞 | 第46-47页 |
| 1.2.5 绵羊前脂肪细胞RNA的提取以及cDNA的合成 | 第47页 |
| 1.2.6 实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-299a-3p和UCP2 mRNA表达量 | 第47页 |
| 1.2.7 Western Blot检测转染后细胞中UCP2表达水平 | 第47-48页 |
| 1.2.8 双荧光素酶报告系统检测分析 | 第48-49页 |
| 1.3 数据处理 | 第49页 |
| 2 试验结果 | 第49-54页 |
| 2.1 pAdTrack-CMV-miR-299a-3p和pmirGLO-UCP2 3'-UTR载体的构建 | 第49-51页 |
| 2.1.1 pAdTrack-CMV-miR-299a-3p 构建 | 第49页 |
| 2.1.2 T克隆载体与pmirGLO荧光报告载体酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 2.1.3 pmirGLO-UCP2 3'-UTR载体结构图 | 第50-51页 |
| 2.2 绵羊前体脂肪细胞中pAdTrack-CMV载体转染效率的优化 | 第51-52页 |
| 2.2.1 转染试剂对于细胞的影响 | 第51页 |
| 2.2.2 转染试剂浓度对转染效率的影响 | 第51-52页 |
| 2.3 共转染HEK293T验证候选靶基因 | 第52页 |
| 2.4 转染后细胞中miR-299a-3p和UCP2 mRNA的表达水平 | 第52-53页 |
| 2.5 转染过表达载体后UCP2蛋白表达水平 | 第53-54页 |
| 2.6 过表达载体转染后细胞分化的影响 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 创新与特色 | 第58-59页 |
| 进一步的研究内容 | 第59-60页 |
| Abstract | 第60-61页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
