| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 黑色素细胞产生黑色素的相关通路简介 | 第10-11页 |
| 1.1 RAS/RAF通路 | 第10页 |
| 1.2 α-MSH/MC1R通路 | 第10页 |
| 1.3 ET1/ETBR通路 | 第10-11页 |
| 1.4 Wnt通路 | 第11页 |
| 2 PAX转录因子家族在神经嵴发育中的作用及其研究现状 | 第11-16页 |
| 2.1 黑色素细胞的产生及PAX转录因子家族的结构特征 | 第11-14页 |
| 2.2 PAX家族在神经嵴发育中的研究现状 | 第14-16页 |
| 3 Pax6与黑色素生成的关系及Pax6~(10Neu)基因的来源 | 第16-17页 |
| 4 生物信息学简介 | 第17页 |
| 4.1 生物信息学的发展历程 | 第17页 |
| 4.2 生物信息学对调控黑色素细胞黑色素生成相关基因研究的现实意义 | 第17页 |
| 5 本试验拟解决的问题 | 第17-19页 |
| 实验一 Pax6~(10Neu)基因相关生物信息学分析 | 第19-23页 |
| 1 实验方法 | 第19页 |
| 1.1 小鼠PAX家族氨基酸序列比对 | 第19页 |
| 1.2 小鼠Pax6~(10Neu)蛋白二级结构和下游基因结合位点分析 | 第19页 |
| 1.3 小鼠MITF、TYR、TYRP1、TYRP2启动子中Pax6作用位点预测 | 第19页 |
| 2 结果与分析 | 第19-22页 |
| 2.1 小鼠PAX家族氨基酸序列比对 | 第19-20页 |
| 2.2 小鼠Pax6~(10Neu) PAI亚结构域结构完整性分析 | 第20-21页 |
| 2.3 小鼠MITF、TYR、TYRP1、TYRP2启动子中Pax6作用位点预测 | 第21-22页 |
| 3 小结 | 第22-23页 |
| 实验二 Pax6~(10Neu)基因的扩增和真核表达载体的构建 | 第23-29页 |
| 1 实验材料 | 第23页 |
| 1.1 实验仪器 | 第23页 |
| 1.2 实验试剂及耗材 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.1 带有酶切位点的PCR引物设计与合成 | 第23页 |
| 2.2 小鼠黑色素细胞总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.3 小鼠细胞cDNA获取 | 第24页 |
| 2.4 扩增Pax6~(10Neu)基因全cds区序列 | 第24-25页 |
| 2.5 普通PCR产物的纯化 | 第25页 |
| 2.6 T载体连接、转化及蓝白斑筛选 | 第25页 |
| 2.7 慢病毒载体连接、转化及菌斑的筛选 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-28页 |
| 3.1 小鼠Pax6~(10Neu)基因序列的获得 | 第26页 |
| 3.2 含有酶切位点的Pax6~(10Neu)基因cds区扩增 | 第26页 |
| 3.3 Pax6~(10Neu)基因的纯化 | 第26-27页 |
| 3.4 Pax6~(10Neu)基因的T载体连接 | 第27页 |
| 3.5 Pax6~(10Neu)基因慢病毒表达载体构建 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-29页 |
| 实验三 过表达小鼠Pax6~(10Neu)基因对小鼠黑色素细胞中黑色素生成的影响 | 第29-34页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| 1.1 实验仪器 | 第29页 |
| 1.2 实验试剂 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.1 小鼠黑色素细胞的培养和转染 | 第29页 |
| 2.2 Quantitative real-time PCR检测 | 第29页 |
| 2.3 蛋白免疫印迹试验 | 第29-30页 |
| 2.4 黑色素含量测定 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-33页 |
| 3.1 小鼠黑色素细胞培养及细胞转染 | 第30页 |
| 3.2 细胞转染后相关检测 | 第30-33页 |
| 3.3 转染后黑色素含量测定 | 第33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 实验四 过表达小鼠Pax6~(10Neu)基因对绵羊黑色素细胞中黑色素生成的影响 | 第34-37页 |
| 1 实验材料 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 3.1 小鼠Pax6~(10Neu)氨基酸序列与绵羊Pax6氨基酸序列比对 | 第34页 |
| 3.2 黑色素细胞的培养 | 第34页 |
| 3.3 质粒真核表达载体在黑色素细胞中的转染 | 第34-36页 |
| 4 小结 | 第36-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 全文结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| Abstract | 第46页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
