| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-35页 |
| 1.1 CRISPR-Cas系统简介 | 第13-32页 |
| 1.1.1 CRISPR-Cas系统的发现与发展 | 第14-15页 |
| 1.1.2 CRISPR-Cas系统的免疫作用机制 | 第15-20页 |
| 1.1.3 对目标DNA的识别依赖PAM位点 | 第20-21页 |
| 1.1.4 新spacer的获取 | 第21-24页 |
| 1.1.5 CRISPR-Cas系统用作基因编辑 | 第24-28页 |
| 1.1.6 CRISPR-Cas系统在细菌生理中的作用 | 第28-32页 |
| 1.2 蜡状芽胞杆菌群简介 | 第32-33页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第32-33页 |
| 1.2.2 B.thuringiensis应用于防治农业病虫害 | 第33页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第33-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-55页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-41页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和引物 | 第35-37页 |
| 2.2.2 供试抗生素 | 第37-38页 |
| 2.2.3 培养基 | 第38-39页 |
| 2.2.4 试剂、耗材及仪器 | 第39-40页 |
| 2.2.5 常用试剂、缓冲液及配方 | 第40-41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-55页 |
| 2.3.1 DNA常规操作 | 第41-44页 |
| 2.3.2 RNA相关操作 | 第44-46页 |
| 2.3.3 感受态细胞的制备及转化 | 第46-48页 |
| 2.3.4 苏云金芽胞杆菌晶胞混合物相关操作 | 第48-50页 |
| 2.3.5 秀丽小杆线虫相关操作 | 第50-52页 |
| 2.3.6 Bt菌株与噬菌体共培养 | 第52页 |
| 2.3.7 光学显微镜观察 | 第52-53页 |
| 2.3.8 质粒转化实验 | 第53页 |
| 2.3.9 细菌群体性实验 | 第53页 |
| 2.3.10 细菌抗逆性实验 | 第53-54页 |
| 2.3.11 芽胞形成率 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-84页 |
| 3.1 蜡状芽胞杆菌群中存在CRISPR-Cas系统 | 第55-60页 |
| 3.1.1 蜡状芽胞杆菌群中Ⅱ型CRISPR-Cas系统退化 | 第56-58页 |
| 3.1.2 蜡状芽胞杆菌群Ⅰ型系统中Cas蛋白活跃表达 | 第58-60页 |
| 3.1.3 B.cereus VD115及BMB1685中crRNA转录形成 | 第60页 |
| 3.2 B.cereus VD115中type Ⅰ-C CRISPR-Cas系统具有免疫功能 | 第60-63页 |
| 3.2.1 VD115中Ⅰ型CRISPR-Cas系统PAM位点为TTN | 第60-62页 |
| 3.2.2 VD115中Ⅰ型系统对含有protospacer的质粒有免疫功能 | 第62-63页 |
| 3.3 获取CRISPR-Cas系统的Bt菌株对噬菌体产生抗性 | 第63-69页 |
| 3.3.1 BMB1685与纯化噬菌体共培养 | 第63-65页 |
| 3.3.2 BMB1685与混合噬菌体共培养 | 第65-67页 |
| 3.3.3 BMB1685与噬菌体共培养时能获取新spacer | 第67-69页 |
| 3.4 VD115中的Ⅰ型系统用作基因编辑系统 | 第69-74页 |
| 3.4.1 CRISPR-Cas系统敲除YBT-15 18 cry6Aa | 第70-72页 |
| 3.4.2 CRISPR-Cas系统对Bt菌株染色体基因进行同框缺失、点突变 | 第72-74页 |
| 3.5 CRISPR-Cas系统对YBT-1518杀线虫活性具有增效作用 | 第74-75页 |
| 3.6 CRISPR-Cas系统不利于宿主菌适应多样化环境 | 第75-84页 |
| 3.6.1 CRISPR-Cas系统影响菌体的生长 | 第75-76页 |
| 3.6.2 CRISPR-Cas系统不利于BMB1685芽胞的形成 | 第76-77页 |
| 3.6.3 CRISPR-Cas系统不利于细菌群游 | 第77-78页 |
| 3.6.4 CRISPR-Cas系统不利于细菌对高盐环境的耐受 | 第78-79页 |
| 3.6.5 CRISPR-Cas系统不利于BMB1685对酸性环境的耐受 | 第79-80页 |
| 3.6.6 CRISPR-Cas系统不利于BMB1685生物膜的形成 | 第80-81页 |
| 3.6.7 CRISPR-Cas系统不利于YBT-1518在秀丽小杆线虫体内的定植 | 第81-82页 |
| 3.6.8 蜡状芽胞杆菌群中CRISPR-Cas系统出现退化现象 | 第82-83页 |
| 3.6.9 蜡状芽胞杆菌群中CRISPR-Cas系统不利于宿主菌对环境的适应 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 4.1 噬菌体编码anti-CRISPR逃避宿主的CRISPR-Cas系统 | 第84页 |
| 4.2 CRISPR-Cas系统不利于宿主对环境的适应 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
