| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-28页 |
| 1.1 口蹄疫与口蹄疫病毒 | 第17页 |
| 1.2 口蹄疫病毒蛋白及其功能 | 第17-20页 |
| 1.2.1 结构蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| 1.2.2 非结构蛋白及其功能 | 第18-20页 |
| 1.3 FMD合成肽疫苗的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 酵母双杂交技术的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.4.1 酵母双杂交技术的基本原理 | 第23页 |
| 1.4.2 酵母双杂交技术的优越性与局限性 | 第23-24页 |
| 1.4.3 酵母双杂交技术的改进与发展 | 第24-25页 |
| 1.4.4 酵母双杂交技术的应用 | 第25-26页 |
| 1.5 FMDV与宿主相互作用的研究进展 | 第26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 牛FMDA型合成肽疫苗的构建及其免疫效果评价 | 第28-42页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 动物试验的伦理准则 | 第28-29页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第29页 |
| 2.1.3 毒株与细胞 | 第29页 |
| 2.1.4 主要试剂耗材和仪器 | 第29页 |
| 2.1.5 实验所用溶液及其配制 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 FMDVA/HuBWH/CHA/2009TCID50的测定 | 第30页 |
| 2.2.2 FMDVA/HuBWH/CHA/2009对豚鼠ID50的测定 | 第30页 |
| 2.2.3 抗原表位基因的选择、组合以及合成 | 第30-31页 |
| 2.2.4 PA、PB、PC三组合成肽疫苗免疫豚鼠效力试验 | 第31-32页 |
| 2.2.5 PB合成肽疫苗免疫豚鼠最小有效剂量的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.6 PA、PB、PC三组合成肽疫苗牛体免疫保护效力试验 | 第33-34页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第34页 |
| 2.3 结果 | 第34-39页 |
| 2.3.1 FMDVA/HuBWH/CHA/2009株TCID50的测定结果 | 第34页 |
| 2.3.2 FMDVA/HuBWH/CHA/2009株对豚鼠ID50的测定结果 | 第34-35页 |
| 2.3.3 PA、PB、PC三组合成肽疫苗免疫豚鼠试验结果 | 第35-37页 |
| 2.3.4 PB合成肽疫苗最小有效免疫剂量的测定结果 | 第37-38页 |
| 2.3.5 牛免疫效力试验结果 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 FMDVVP1互作蛋白的筛选与功能研究 | 第42-76页 |
| 3.1 材料 | 第42-46页 |
| 3.1.1 试剂与试剂盒 | 第42-44页 |
| 3.1.2 毒株与细胞 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器、耗材 | 第44页 |
| 3.1.4 实验所用溶液及其配制 | 第44-46页 |
| 3.2 方法 | 第46-62页 |
| 3.2.1 引物设计与合成 | 第46-47页 |
| 3.2.2 猪组织cDNA表达文库的构建 | 第47页 |
| 3.2.3 O型FMDVVP1基因的扩增与克隆 | 第47-51页 |
| 3.2.4 O型FMDVVP1诱饵表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.2.5 重组诱饵表达载体转化酵母菌NMY | 第52-54页 |
| 3.2.6 DUALhunter系统功能验证以及诱饵载体自激活检测 | 第54页 |
| 3.2.7 利用酵母双杂交方法以VP1为诱饵蛋白筛选猪组织cDNA文库 | 第54-57页 |
| 3.2.8 免疫共沉淀技术验证VP1蛋白与zyxin蛋白的相互作用 | 第57-59页 |
| 3.2.9 激光共聚焦技术检测VP1与zyxin在细胞中的共定位 | 第59页 |
| 3.2.10 FMDV感染对细胞zyxin表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.11 干扰zyxin的表达对FMDV增殖的影响 | 第60-61页 |
| 3.2.12 宿主细胞zyxin过表达对FMDV增殖的影响 | 第61页 |
| 3.2.13 统计分析 | 第61-62页 |
| 3.3 结果 | 第62-74页 |
| 3.3.1 猪组织总RNA的提取和鉴定 | 第62页 |
| 3.3.2 猪组织cDNA表达文库的质量鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3.3 重组克隆载体pMD18T-VP1的构建 | 第63-64页 |
| 3.3.4 诱饵表达载体pDHB1-VP1的构建 | 第64-65页 |
| 3.3.5 酵母菌株NMY51基因型的检测 | 第65页 |
| 3.3.6 诱饵载体pDHB1-VP1转入酵母菌NMY51及其毒性检测 | 第65-66页 |
| 3.3.7 DUALhunter系统功能验证以及诱饵载体自激活检测 | 第66-67页 |
| 3.3.8 以VP1为诱饵蛋白利用酵母双杂交方法筛选猪组织cDNA文库 | 第67-69页 |
| 3.3.9 免疫共沉淀技术验证VP1蛋白与zyxin蛋白的相互作用 | 第69-71页 |
| 3.3.10 激光共聚焦技术检测VP1与zyxin在细胞中的定位 | 第71-72页 |
| 3.3.11 FMDV感染诱导zyxin表达量上调 | 第72-73页 |
| 3.3.12 干扰zyxin的表达抑制FMDV的增殖 | 第73-74页 |
| 3.3.13 上调zyxin表达促进FMDV的增殖 | 第74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 FMDV2B互作蛋白的筛选与功能研究 | 第76-90页 |
| 4.1 材料 | 第76-77页 |
| 4.2 方法 | 第77-80页 |
| 4.2.1 引物设计与合成 | 第77页 |
| 4.2.2 FMDV2B诱饵表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 4.2.3 FMDV2B诱饵表达载体的毒性和自激活效应检测 | 第78页 |
| 4.2.4 诱饵载体pBT3-N-2B筛选猪组织cDNA文库 | 第78页 |
| 4.2.5 免疫共沉淀技术验证2B蛋白与eEF1G蛋白的相互作用 | 第78-79页 |
| 4.2.6 激光共聚焦技术检测2B与eEF1G在细胞中的共定位 | 第79页 |
| 4.2.7 FMDV感染对细胞eEF1G表达的影响 | 第79页 |
| 4.2.8 干扰eEF1G的表达对FMDV增殖的影响 | 第79页 |
| 4.2.9 宿主细胞eEF1G过表达对FMDV增殖的影响 | 第79-80页 |
| 4.2.10 统计分析 | 第80页 |
| 4.3 结果 | 第80-88页 |
| 4.3.1 诱饵表达载体pBT3-N-2B的构建 | 第80页 |
| 4.3.2 诱饵表达载体pBT3-N-2B的毒性和自激活效应检测 | 第80-82页 |
| 4.3.3 诱饵载体pBT3-N-2B筛选猪组织cDNA文库 | 第82-84页 |
| 4.3.4 免疫共沉淀技术验证2B蛋白与eEF1G蛋白的相互作用 | 第84-85页 |
| 4.3.5 激光共聚焦技术检测2B与eEF1G在细胞中的共定位 | 第85-86页 |
| 4.3.6 FMDV感染诱导宿主细胞蛋白eEF1G表达量上调 | 第86页 |
| 4.3.7 干扰eEF1G的表达抑制FMDV的增殖 | 第86-87页 |
| 4.3.8 过表达eEF1G促进FMDV的增殖 | 第87-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-90页 |
| 第五章 全文结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简历 | 第103页 |
