| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-20页 |
| 第二章 BBS1重组质粒的验证 | 第20-26页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 BBS1重组载体的转化 | 第21-22页 |
| 2.2.2 BBS1重组载体无内毒素质粒大提 | 第22页 |
| 2.3 实验结果 | 第22-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 BBS1基因过表达和沉默细胞模型的构建及验证 | 第26-46页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第26-28页 |
| 3.1.1 试验路线 | 第26页 |
| 3.1.1.1 BBS1基因过表达细胞模型的构建及验证路线 | 第26页 |
| 3.1.1.2 BBS1基因沉默细胞模型的构建及验证路线 | 第26页 |
| 3.1.2 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.3 实验主要试剂 | 第27页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 3.1.5 数据统计分析 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 293T细胞培养 | 第28-29页 |
| 3.2.2 293T细胞的转染 | 第29-31页 |
| 3.2.2.1 BBS1基因过表达细胞模型的构建及验证的细胞转染条件 | 第29-30页 |
| 3.2.2.2 BBS1基因沉默细胞模型的构建及验证的细胞转染条件 | 第30-31页 |
| 3.2.3 BBS1引物及siRNA(干扰RNA)的设计与合成 | 第31页 |
| 3.2.4 RNA提取及逆转录 | 第31页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 3.2.6 Western blot检测 BBS1 | 第32-35页 |
| 3.2.7 数据分析 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-42页 |
| 3.3.1 BBS1基因过表达细胞模型的构建及验证的实验结果 | 第35-36页 |
| 3.3.1.1 293T细胞的培养 | 第35-36页 |
| 3.3.1.2 重组载体转染293T细胞的BBS1蛋白质检测 | 第36页 |
| 3.3.2 BBS1基因沉默细胞模型的构建及验证 | 第36-42页 |
| 3.3.2.1 提取的RNA电泳验证 | 第36-37页 |
| 3.3.2.2 荧光定量PCR结果 | 第37页 |
| 3.3.2.3 Western Blot验证结果 | 第37-39页 |
| 3.3.2.4 BBS1荧光定量结果 | 第39-40页 |
| 3.3.2.5 BBS1不同干扰组各个时间段的表达情况 | 第40-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-45页 |
| 3.4.1 BBS1基因过表达细胞模型的构建及验证结果讨论 | 第42页 |
| 3.4.2 BBS1基因沉默细胞模型的构建及验证结果讨论 | 第42-45页 |
| 3.4.2.1 核酸及蛋白水平验证结果分析 | 第42-43页 |
| 3.4.2.2 BBS1荧光定量结果分析 | 第43页 |
| 3.4.2.3 BBS1不同干扰组各个时间段的表达情况分析 | 第43-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 BBS1对细胞增殖及迁移的影响 | 第46-59页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第46-47页 |
| 4.1.1 细胞增殖试验路线 | 第46页 |
| 4.1.2 细胞迁移试验路线 | 第46页 |
| 4.1.3 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.4 实验主要试剂 | 第47页 |
| 4.1.5 主要实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.6 数据统计分析 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 293T细胞的培养 | 第47页 |
| 4.2.2 293T细胞的转染 | 第47-48页 |
| 4.2.3 RNA提取及逆转录 | 第48页 |
| 4.2.4 荧光定量PCR | 第48页 |
| 4.2.5 MTS检测 | 第48页 |
| 4.2.6 划痕实验方法 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-57页 |
| 4.3.1 细胞增殖实验结果 | 第49-51页 |
| 4.3.1.1 荧光定量数据分析 | 第49页 |
| 4.3.1.2 MTS结果 | 第49-51页 |
| 4.3.2 细胞迁移实验结果 | 第51-57页 |
| 4.3.2.1 实验结果图片采集 | 第51-56页 |
| 4.3.2.2 实验结果数据汇总 | 第56-57页 |
| 4.4 增殖实验讨论 | 第57页 |
| 4.5 迁移实验讨论 | 第57-58页 |
| 4.6 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 BBS1与5个BBS家系差异表达基因相关性 | 第59-78页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第59页 |
| 5.1.1 试验路线 | 第59页 |
| 5.1.2 实验材料 | 第59页 |
| 5.1.3 实验主要试剂 | 第59页 |
| 5.1.4 主要实验仪器 | 第59页 |
| 5.1.5 数据统计分析 | 第59页 |
| 5.2 实验方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1 293T细胞的培养 | 第59-60页 |
| 5.2.2 293T细胞的转染 | 第60页 |
| 5.2.3 荧光定量 | 第60页 |
| 5.2.4 数据分析 | 第60页 |
| 5.3 实验结果 | 第60-64页 |
| 5.3.1 外源BBS1及其干扰RNA(siRNA)对其他基因的干扰结果 | 第60-64页 |
| 5.3.1.1 荧光定量PCR结果 | 第60-62页 |
| 5.3.1.2 荧光定量数据分析结果 | 第62-64页 |
| 5.4 各个基因在不同干扰组、不同时间段的表达情况 | 第64-73页 |
| 5.4.1 KIF3A | 第64-66页 |
| 5.4.2 ANXA1 | 第66-68页 |
| 5.4.3 β-Tublin | 第68-69页 |
| 5.4.4 β-catenin | 第69-71页 |
| 5.4.5 kif2a | 第71-73页 |
| 5.5 讨论 | 第73-76页 |
| 5.5.1 外源BBS1及siRNA对KIF3A作用效果的分析 | 第73页 |
| 5.5.2 外源BBS1及siRNA对β-catenin干扰效果的分析 | 第73-74页 |
| 5.5.3 外源BBS1及siRNA对β-Tublin干扰效果的分析 | 第74页 |
| 5.5.4 外源BBS1及siRNA对ANXA1干扰效果的分析 | 第74-75页 |
| 5.5.5 外源BBS1及siRNA对kif2a干扰效果的分析 | 第75-76页 |
| 5.6 小结 | 第76-78页 |
| 第六章 巴德-毕氏综合征有关致病基因与病理的研究进展 | 第78-87页 |
| 6.1 BBS与纤毛 | 第78-83页 |
| 6.1.1 纤毛结构及纤毛作用 | 第78-79页 |
| 6.1.2 初级纤毛的形成及IFT体系与BBS蛋白质的关系 | 第79-83页 |
| 6.1.2.1 初级纤毛形成过程以及IFT体系 | 第79-81页 |
| 6.1.2.2 BBSome与IFT的关系 | 第81-83页 |
| 6.2 BBS临床表型与机理 | 第83-86页 |
| 6.2.1 BBS相关致病基因及遗传模型 | 第83页 |
| 6.2.2 BBS表型与纤毛缺陷 | 第83-86页 |
| 6.2.2.1 失嗅 | 第84页 |
| 6.2.2.2 视网膜退化 | 第84-85页 |
| 6.2.2.3 脑室扩大 | 第85页 |
| 6.2.2.4 肥胖 | 第85-86页 |
| 6.2.2.5 不孕症 | 第86页 |
| 6.3 BBS有关纤毛病理的研究展望 | 第86-87页 |
| 总结 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第95-96页 |
| 附录B 作者介绍 | 第96页 |
