| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1. 天然免疫信号通路 | 第12-14页 |
| 1.1 天然免疫的概念 | 第12页 |
| 1.2 天然免疫的重要性 | 第12-13页 |
| 1.3 天然免疫PRRs主要介导的信号通路 | 第13-14页 |
| 2. 干扰素 | 第14-15页 |
| 2.1 干扰素的生物学特性 | 第14-15页 |
| 3. 鸭干扰素的研究进展 | 第15-18页 |
| 3.1 鸭IFN-α的研究进展 | 第15-16页 |
| 3.2 鸭IFN-β的研究进展 | 第16页 |
| 3.3 鸭IFN-λ的研究进展 | 第16-17页 |
| 3.4 鸭IFN-γ的研究进展 | 第17-18页 |
| 4. NDRV及新型鸭呼肠孤病毒病的预防 | 第18页 |
| 5. 研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 NDRV诱导天然免疫 | 第20-29页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1.1 细胞与病毒 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 1.4 引物序列 | 第20页 |
| 1.5 成纤维细胞的制备与培养 | 第20-21页 |
| 1.6 NDRV感染细胞 | 第21页 |
| 1.7 RNA的提取与cDNA的制备 | 第21-22页 |
| 1.8 Real Time PCR体系和条件 | 第22-23页 |
| 1.8.1 Real Time PCR体系 | 第22-23页 |
| 1.8.2 Real Time PCR条件 | 第23页 |
| 2. 结果与分析 | 第23-27页 |
| 3.讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 半番鸭IFN-β、IFN-λ基因的克隆及序列分析 | 第29-45页 |
| 1. 材料与方法 | 第29-34页 |
| 1.1 病料 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第29页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第29页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第29页 |
| 1.3 引物设计 | 第29-30页 |
| 1.4 PCR扩增半番鸭IFN-β基因 | 第30-31页 |
| 1.4.1 RNA的提取与cDNA的制备 | 第30-31页 |
| 1.4.2 目的片段的扩增 | 第31页 |
| 1.4.3 目的片段的纯化回收 | 第31页 |
| 1.5 重组质粒的构建及鉴定 | 第31-34页 |
| 1.5.1 载体与目的片段的酶切回收 | 第31-32页 |
| 1.5.2 酶切产物连接 | 第32页 |
| 1.5.3 转化 | 第32-33页 |
| 1.5.4 质粒的提取 | 第33页 |
| 1.5.5 重组质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| 1.6 半番鸭IFN基因序列的测定及生物信息学分析 | 第34页 |
| 2. 结果与分析 | 第34-42页 |
| 2.1 半番鸭IFN基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.1.1 半番鸭IFN-β基因的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.1.2 半番鸭IFN-λ基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2 重组质粒PCR与双酶切鉴定 | 第35-38页 |
| 2.2.1 半番鸭IFN-β重组质粒PCR与双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.2 半番鸭IFN-λ重组质粒PCR与双酶切鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3 核甘酸同源性比较 | 第38-39页 |
| 2.3.1 半番鸭IFN-β核甘酸同源性比较 | 第38页 |
| 2.3.2 半番鸭IFN-λ核甘酸同源性比较 | 第38-39页 |
| 2.4 遗传进化分析 | 第39-40页 |
| 2.4.1 半番鸭IFN-β遗传进化分析 | 第39-40页 |
| 2.4.2 半番鸭IFN-λ遗传进化分析 | 第40页 |
| 2.5 信号肽与跨膜区分析 | 第40-42页 |
| 2.5.1 半番鸭IFN-β信号肽与跨膜区分析 | 第40-41页 |
| 2.5.2 半番鸭IFN-λ信号肽与跨膜区分析 | 第41-42页 |
| 3. 讨论 | 第42-45页 |
| 第四章 半番鸭IFN-β基因的原核表达 | 第45-52页 |
| 1. 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 主要试剂 | 第45页 |
| 1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 1.3 重组质粒pET-DuIFN-β的诱导表达 | 第45-46页 |
| 1.4 重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 1.5 重组蛋白Western blotting分析 | 第47-48页 |
| 2. 结果与分析 | 第48-51页 |
| 2.1 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| 2.2 重组蛋白纯化SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| 2.3 重组蛋白Western blotting分析 | 第50-51页 |
| 3. 讨论 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
