| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第1章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 钙调素功能的研究进展 | 第7-8页 |
| 1.1.1 钙调素(CaM)的基本功能特征 | 第7页 |
| 1.1.2 钙调素(CaM)功能的遗传学分析 | 第7-8页 |
| 1.2 钙调素的蛋白结构特征 | 第8-10页 |
| 1.3 钙调素的下游靶蛋白 | 第10-13页 |
| 1.3.1 CaMKs | 第10-12页 |
| 1.3.1.1 CaMKs概况 | 第10-11页 |
| 1.3.1.2 CaMKs的激活机制 | 第11-12页 |
| 1.3.2 Calcineurin | 第12-13页 |
| 1.3.2.1 Calcineurin概况 | 第12-13页 |
| 1.3.2.2 Calcineurin的激活机制 | 第13页 |
| 1.3.2.3 转录因子CRZ | 第13页 |
| 1.4 钙调素在真菌压力响应方面的功能 | 第13-15页 |
| 第2章 烟曲霉钙调素的基本生物学功能 | 第15-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 本部分所用菌株、质粒以及培养基配方 | 第15-17页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 菌株的构建 | 第17-23页 |
| 2.2.1.1 钙调素条件菌株pniiA-CaM的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.1.2 钙调素回补菌株的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.1.3 钙调素的GFP荧光标记菌株的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.1.4 钙调素EF-loop缺失菌株的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.2 原生质体转化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 DNA少量提取 | 第24-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-28页 |
| 2.3.1 钙调素条件菌株的表型鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 钙调素的胞内定位及分子大小的研究 | 第26-27页 |
| 2.3.3 钙调素中EF-hand motif的功能研究 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 烟曲霉钙调素的钙离子结合位点的研究 | 第30-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 本部分所用菌株、质粒以及培养基配方 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 菌株的构建 | 第30-33页 |
| 3.2.1.1 钙调素原位点突变菌株的构建 | 第30-32页 |
| 3.2.1.2 钙调素N端GFP标记的点突变菌株的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 Western blot | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-39页 |
| 3.3.1 钙调素点突变菌株的表型分析 | 第34-37页 |
| 3.3.2 突变位点对于钙调素钙离子结合能力的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.3 钙结合位点突变的钙调素蛋白定位分析 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第4章 烟曲霉钙调素在压力响应及钙平衡方面的功能研究 | 第41-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.1 本部分所用菌株、质粒以及培养基配方 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 点突变测钙菌株的构建 | 第41-42页 |
| 4.2.2 烟曲霉下胞质内钙浓度[Ca~(2+)]c的测定 | 第42-43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-46页 |
| 4.3.1 点突变菌株在不同逆境下的表型测试 | 第43-45页 |
| 4.3.1.1 点突变菌株在高渗环境下的表型测试 | 第43-44页 |
| 4.3.1.2 点突变菌株在高温压力以及氧化压力下的表型测试 | 第44-45页 |
| 4.3.2 点突变菌株CaM(124)胞质内钙水平的测试 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第5章 钙调素对下游靶蛋白的影响 | 第48-56页 |
| 5.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.1 本部分所用菌株、质粒以及培养基配方 | 第48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 5.2.1 菌株的构建 | 第48-51页 |
| 5.2.1.1 CRZ-GFP荧光标记菌株的构建 | 第48-49页 |
| 5.2.1.2 激酶CmkA缺失突变菌株及其高表达菌株的构建 | 第49-50页 |
| 5.2.1.3 激酶CmkB点突变菌株及其高表达菌株的构建 | 第50-51页 |
| 5.2.1.4 钙调磷酸酶缺失突变菌株及其高表达菌株的构建 | 第51页 |
| 5.2.2 菌丝荧光显微镜观察 | 第51-52页 |
| 5.3 实验结果 | 第52-54页 |
| 5.3.1 钙离子诱导的Crz入核现象依赖于钙调素的钙离子结合能力 | 第52-53页 |
| 5.3.2 钙调素的钙离子结合能力的缺陷对下游激酶的影响 | 第53-54页 |
| 5.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第6章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
