| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第7-14页 |
| 1.1 内质网应激与细胞凋亡 | 第7-8页 |
| 1.2 EIF2α激酶家族 | 第8-10页 |
| 1.3 PERK-eIF2α介导的信号途径 | 第10-11页 |
| 1.4 PERK和未折叠蛋白反应 | 第11页 |
| 1.5 PERK和疾病 | 第11-12页 |
| 1.6 鱼类PERK的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第13-14页 |
| 第二章 材料和方法 | 第14-31页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第14-18页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第15-16页 |
| 2.1.3 载体、菌种与细胞株 | 第16-17页 |
| 2.1.4 引物表 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18页 |
| 2.3 相关软件 | 第18页 |
| 2.4 实验方法 | 第18-31页 |
| 2.4.1 草鱼各组织总RNA提取 | 第18页 |
| 2.4.2 反转录合成cDNA第一条链 | 第18-19页 |
| 2.4.3 草鱼PERK基因的克隆 | 第19-22页 |
| 2.4.4 CiPERK系统进化分析 | 第22页 |
| 2.4.5 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.4.6 RT-PCR检测草鱼PERK基因的表达水平 | 第23页 |
| 2.4.7 草鱼PERK原核表达载体的构建、表达与纯化 | 第23-25页 |
| 2.4.8 真核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.4.9 细胞转染 | 第27-28页 |
| 2.4.10 WesternBlot检测 | 第28页 |
| 2.4.11 CiPERK与CiGRP78的相互作用 | 第28-30页 |
| 2.4.12 CiPERK对CieIF2α的磷酸化作用 | 第30页 |
| 2.4.13 CiPERK抑制荧光素酶合成的功能的研究 | 第30页 |
| 2.4.14 CCK-8试剂盒法检测细胞存活率 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-42页 |
| 3.1 草鱼PERK的克隆及其分析 | 第31-35页 |
| 3.2 PERK系统进化分析 | 第35-36页 |
| 3.3 TM上调草鱼PERK表达分析 | 第36页 |
| 3.4 草鱼PERK和草鱼GRP78的蛋白互作 | 第36-39页 |
| 3.4.1 真核表达载体pCS2-CiPERK-HA和pCMV-CiGRP78-FLAG的构建和鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4.2 CiPERK与CiGRP78免疫共沉淀结果 | 第37-38页 |
| 3.4.3 GST-pulldown确定CiPERK与CiGRP78相互作用 | 第38-39页 |
| 3.5 CIPERK磷酸化eIF2α | 第39-40页 |
| 3.6 CIPERK对荧光素酶表达的抑制作用 | 第40页 |
| 3.7 草鱼PERK对细胞活性的影响 | 第40-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第53页 |
