| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-39页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 流感病毒 | 第12-18页 |
| 1.2.1 流感病毒的分类组成及形态结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 流感病毒基因组及其编码的蛋白 | 第13-16页 |
| 1.2.3 流感病毒的复制过程 | 第16页 |
| 1.2.4 流感病毒的遗传和变异 | 第16-18页 |
| 1.3 天然免疫 | 第18-22页 |
| 1.3.1 天然免疫和获得性免疫 | 第18页 |
| 1.3.2 病原相关分子模式和病原识别受体 | 第18页 |
| 1.3.3 TLRs介导的抗病毒信号通路 | 第18-20页 |
| 1.3.4 RLRs介导的抗病毒信号通路 | 第20-21页 |
| 1.3.5 NLRs介导的抗病毒信号通路 | 第21页 |
| 1.3.6 胞内DNA受体介导的抗病毒信号通路 | 第21-22页 |
| 1.4 干扰素刺激基因 | 第22-27页 |
| 1.4.1 干扰素和干扰素通路 | 第22-23页 |
| 1.4.2 基因组编辑技术的发展及其在ISGs功能研究中的应用 | 第23-24页 |
| 1.4.3 干扰素刺激基因介导的几个重要抗病通路 | 第24-27页 |
| 1.5 OAS家族基因研究进展 | 第27-38页 |
| 1.5.1 OAS家族基因的组成、进化和结构 | 第27-32页 |
| 1.5.2 OAS家族基因多态性的研究进展 | 第32-33页 |
| 1.5.3 OAS家族基因的作用机制 | 第33-38页 |
| 1.5.4 OASL基因的初步展望 | 第38页 |
| 1.6 本课题的研究目的、意义和研究内容 | 第38-39页 |
| 第二章 材料与方法 | 第39-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-44页 |
| 2.1.1 菌株、载体和病毒 | 第39页 |
| 2.1.2 细胞系和鸡胚 | 第39页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第41-44页 |
| 2.1.6 分析软件/网站 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-65页 |
| 2.2.1 组织和细胞基因组DNA提取 | 第44-45页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.3 蛋白提取及定量 | 第46-47页 |
| 2.2.4 基因克隆和载体构建 | 第47-50页 |
| 2.2.5 定点突变 | 第50-52页 |
| 2.2.6 反转录和定量PCR | 第52-53页 |
| 2.2.7 快速扩增cDNA的5'末端/3'末端 | 第53-54页 |
| 2.2.8 染色体步移技术(Genome walking) | 第54-55页 |
| 2.2.9 地高辛法Southern blot | 第55-56页 |
| 2.2.10 Western blot | 第56-57页 |
| 2.2.11 免疫沉淀 | 第57页 |
| 2.2.12 原核表达纯化 | 第57-58页 |
| 2.2.13 2'-5'寡聚腺苷酸合成酶活性测定 | 第58-59页 |
| 2.2.14 蛋白核酸互作分析 | 第59页 |
| 2.2.15 酵母双杂交 | 第59-60页 |
| 2.2.16 细胞培养、转染及单克隆筛选 | 第60-61页 |
| 2.2.17 荧光素酶活性检测 | 第61页 |
| 2.2.18 基因敲除 | 第61-62页 |
| 2.2.19 病毒繁殖以及滴度测定 | 第62-64页 |
| 2.2.20 数据处理与统计学分析 | 第64-65页 |
| 第三章 鸟类OASL蛋白抗病毒活性分析 | 第65-76页 |
| 3.1 引言 | 第65页 |
| 3.2 鸡和鸭OASL蛋白的抗病毒活性分析 | 第65-72页 |
| 3.2.1 鸭OASL基因全长mRNA序列的获得 | 第65-67页 |
| 3.2.2 稳定表达鸭OASL基因DF1细胞系的建立 | 第67-68页 |
| 3.2.3 OASL基因大片段敲除细胞系的建立 | 第68-70页 |
| 3.2.4 鸡和鸭OASL基因对A型流感病毒的抗病毒活性分析 | 第70-71页 |
| 3.2.5 鸭OASL蛋白抗病毒谱分析 | 第71-72页 |
| 3.3 鸵鸟OASL蛋白的抗病毒活性分析 | 第72-74页 |
| 3.3.1 有效表达鸵鸟OASL蛋白质粒的构建 | 第72-73页 |
| 3.3.2 鸵鸟OASL蛋白对A型流感病毒的抗病毒活性分析 | 第73-74页 |
| 3.3.3 鸵鸟OASL蛋白抗病毒谱分析 | 第74页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 鸟类和哺乳类OASL蛋白激活OAS/RNase L通路机制分析 | 第76-86页 |
| 4.1 引言 | 第76页 |
| 4.2 鸭和鸵鸟OASL蛋白OAS酶催化活性分析 | 第76-79页 |
| 4.2.1 鸟类OASL蛋白OAS酶活性的预测 | 第76页 |
| 4.2.2 鸭OASL蛋白OAS酶活性分析 | 第76-79页 |
| 4.2.3 鸵鸟OASL蛋白OAS酶活性分析 | 第79页 |
| 4.3 人和小鼠OASL蛋白及其3D突变体OAS酶活性分析 | 第79-81页 |
| 4.3.1 人OASL和小鼠Oasl2蛋白及其3D突变体酶活性分析 | 第79-80页 |
| 4.3.2 人OASL和小鼠Oasl2蛋白及其3D突变体的抗病毒活性分析 | 第80-81页 |
| 4.4 RNaseL酶活性分析 | 第81-83页 |
| 4.4.1 鸭和鸵鸟OASL蛋白对RNase L的激活状态分析 | 第81页 |
| 4.4.2 人OASL和小鼠Oasl2蛋白及其3D突变体对RNase L的激活状态分析 | 第81-83页 |
| 4.5 鸟类和哺乳类OASL蛋白调控RNase L通路分析 | 第83-84页 |
| 4.5.1 鸭和鸵鸟OASL蛋白放大RNase L通路 | 第83页 |
| 4.5.2 人OASL-3D和小鼠Oasl2蛋白放大RNase L通路 | 第83-84页 |
| 4.6 结果分析与讨论 | 第84-86页 |
| 第五章 鸟类和哺乳类OASL关键结构域功能探究 | 第86-97页 |
| 5.1 引言 | 第86页 |
| 5.2 鸭和鸵鸟OASL蛋白截短体功能分析 | 第86-92页 |
| 5.2.1 鸭和鸵鸟OASL蛋白截短体抗病毒活性分析 | 第86-88页 |
| 5.2.2 鸭和鸵鸟OASL蛋白截短体OAS酶活性分析 | 第88-90页 |
| 5.2.3 鸭和鸵鸟OASL蛋白截短体对RNase L的激活状态分析 | 第90-91页 |
| 5.2.4 鸭和鸵鸟OASL蛋白截短体影响RNase L及干扰素相关基因表达的分析 | 第91-92页 |
| 5.3 人OASL和小鼠Oasl2蛋白截短体功能分析 | 第92-95页 |
| 5.3.1 人OASL和小鼠Oasl2蛋白截短体抗病毒活性分析 | 第92-93页 |
| 5.3.2 人OASL和小鼠Oasl2蛋白截短体2-5A酶活性分析 | 第93页 |
| 5.3.3 人OASL和小鼠Oasl2蛋白截短体对RNase L的激活状态分析 | 第93-94页 |
| 5.3.4 人OASL和小鼠Oasl2蛋白截短体对RNase L及干扰素相关基因的表达分析 | 第94页 |
| 5.3.5 鸟类和哺乳类OASL相关截短体dsRNA结合能力分析 | 第94-95页 |
| 5.4 结果分析与讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 鸟类和哺乳类OASL放大RIG-Ⅰ信号通路研究 | 第97-105页 |
| 6.1 引言 | 第97页 |
| 6.2 鸭和鸵鸟OASL-3D~*放大RIG-Ⅰ信号通路研究 | 第97-100页 |
| 6.2.1 鸭和鸵鸟OASL突变体2-5A催化活性和抗病毒活性分析 | 第97-99页 |
| 6.2.2 鸭和鸵鸟OASL及其突变体对RIG-Ⅰ信号通路基因表达的影响 | 第99-100页 |
| 6.2.3 鸭OASL及其突变体与RIG-Ⅰ互作分析 | 第100页 |
| 6.3 人OASL和小鼠Oasl2-3D~*放大RIG-Ⅰ信号通路研究 | 第100-103页 |
| 6.3.1 人OASL和小鼠Oasl2及其3D突变体抗病毒活性分析 | 第100-101页 |
| 6.3.2 人OASL和小鼠Oasl2及其3D突变体对RIG-Ⅰ信号通路基因表达的影响 | 第101页 |
| 6.3.3 人OASL和小鼠Oasl2及其突变体与RIG-Ⅰ互作分析 | 第101-102页 |
| 6.3.4 人OASL-R~*K~*K~*突变体无法放大RIG-Ⅰ信号通路 | 第102-103页 |
| 6.4 结果分析与讨论 | 第103-105页 |
| 第七章 鸟类OASL其他可能抗病机制探究 | 第105-111页 |
| 7.1 引言 | 第105页 |
| 7.2 鸭OASL蛋白结合IRF7基因5'UTR区序列研究 | 第105-108页 |
| 7.2.1 脊椎动物IRF家族成员进化分析 | 第105页 |
| 7.2.2 鸭IRF7基因的克隆和表达分析 | 第105-107页 |
| 7.2.3 鸭OASL蛋白与IRF7基因5'UTR区结合分析 | 第107-108页 |
| 7.3 鸭OASL蛋白与MBD1直接互作研究 | 第108-110页 |
| 7.3.1 脊椎动物MBD1基因的进化和同线性分析 | 第108-110页 |
| 7.3.2 鸭OASL蛋白免疫沉淀分析 | 第110页 |
| 7.4 结果分析与讨论 | 第110-111页 |
| 第八章 结论与展望 | 第111-112页 |
| 8.1 结论 | 第111页 |
| 8.2 展望 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 附录 | 第140-168页 |
| 附录一 鸭AvIFIT基因抑制多种类型病毒的复制及其作用机制 | 第140-144页 |
| 附录二 实验中所用引物、单链DNA和寡核苷酸序列 | 第144-156页 |
| 附录三 本研究中相关序列 | 第156-168页 |
| 个人简历 | 第168-169页 |
