| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 海豚链球菌 | 第10页 |
| 1.2 海豚链球菌的检测方法 | 第10-12页 |
| 1.2.1 生理生化特性检测方法 | 第11页 |
| 1.2.2 基于分子生物学技术的检测法 | 第11-12页 |
| 1.2.3 基于免疫学技术的检测法 | 第12页 |
| 1.2.4 分子学与免疫学相结合的检测系统 | 第12页 |
| 1.3 可视化材料在检测中的应用 | 第12-14页 |
| 1.3.1 胶体金 | 第12-13页 |
| 1.3.2 荧光标记物 | 第13页 |
| 1.3.3 乳胶颗粒 | 第13-14页 |
| 1.4 LAMP与分子杂交技术 | 第14-15页 |
| 1.4.1 LAMP技术 | 第14页 |
| 1.4.2 分子杂交技术 | 第14-15页 |
| 1.4.3 LAMP-胶体金探针技术 | 第15页 |
| 1.5 免疫层析技术 | 第15-16页 |
| 1.6 本课题研究内容及意义 | 第16-17页 |
| 第2章 海豚链球菌单克隆抗体的制备 | 第17-35页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 材料 | 第17-18页 |
| 2.2.1 菌株、细胞及实验动物 | 第17页 |
| 2.2.2 试剂、培养基及缓冲溶液 | 第17-18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.3.1 免疫原的制备 | 第18-19页 |
| 2.3.2 小鼠操作手法 | 第19页 |
| 2.3.3 小鼠免疫 | 第19-20页 |
| 2.3.4 小鼠血清效价测定 | 第20-21页 |
| 2.3.5 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0的准备 | 第21-22页 |
| 2.3.6 细胞融合 | 第22-23页 |
| 2.3.7 融合细胞的培养及阳性筛选 | 第23-24页 |
| 2.3.8 杂交瘤细胞株的特异性筛选 | 第24页 |
| 2.3.9 杂交瘤细胞株的亚克隆 | 第24页 |
| 2.3.10 阳性细胞株的冻存 | 第24-25页 |
| 2.3.11 小鼠腹水制备 | 第25页 |
| 2.3.12 单克隆抗体的粗提和纯化 | 第25页 |
| 2.3.13 单克隆抗体浓度测定和浓缩 | 第25-26页 |
| 2.3.14 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第26页 |
| 2.3.15 单克隆抗体的效价测定 | 第26页 |
| 2.3.16 单克隆抗体特性探究 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第27-33页 |
| 2.4.1 小鼠免疫效果 | 第27-28页 |
| 2.4.2 细胞融合与筛选 | 第28-30页 |
| 2.4.3 单克隆抗体细胞株的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.4 单克隆抗体效价测定 | 第31页 |
| 2.4.5 单抗亚型鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.6 单克隆抗体及其对应抗原表位大小确定 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 结论 | 第34-35页 |
| 第3章 海豚链球菌胶体金免疫试纸条的制备 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-39页 |
| 3.3.1 胶体金的制备 | 第35-36页 |
| 3.3.2 胶体金标记单抗 | 第36-37页 |
| 3.3.3 试纸条的组装 | 第37-38页 |
| 3.3.4 试纸条灵敏度和特异性检测 | 第38-39页 |
| 3.4 实验结果分析 | 第39-43页 |
| 3.4.1 胶体金的制备 | 第39页 |
| 3.4.2 金标溶液制备 | 第39-40页 |
| 3.4.3 抗体配对实验 | 第40-41页 |
| 3.4.4 胶体金试纸条的灵敏度探究 | 第41-42页 |
| 3.4.5 试纸条的特异性探究 | 第42-43页 |
| 3.5 讨论 | 第43-44页 |
| 3.6 结论 | 第44-45页 |
| 第4章 LAMP结合胶体金双探针杂交检测体系的建立 | 第45-58页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 材料 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-50页 |
| 4.3.1 菌株和DNA抽提 | 第45-46页 |
| 4.3.2 目的基因的选择 | 第46页 |
| 4.3.3 LAMP引物和双探针设计 | 第46页 |
| 4.3.4 LAMP反应 | 第46-47页 |
| 4.3.5 胶体金的制备 | 第47页 |
| 4.3.6 胶体双探针的标记 | 第47页 |
| 4.3.7 LAMP-胶体金双探针体系建立 | 第47页 |
| 4.3.8 LAMP-胶体金双探针检测体系优化 | 第47-48页 |
| 4.3.9 LAMP-胶体金双探针系统可行性验证 | 第48页 |
| 4.3.10 LAMP-胶体金双探针系统的灵敏度和特异性 | 第48页 |
| 4.3.11 海豚链球菌的其他方法的检测 | 第48-49页 |
| 4.3.12 对鱼样本的LAMP-胶体金双探针系统检测 | 第49-50页 |
| 4.4 实验结果 | 第50-56页 |
| 4.4.1 LAMP条件优化 | 第50页 |
| 4.4.2 胶体金的标记 | 第50-51页 |
| 4.4.3 LAMP-胶体金双探针检测系统的优化 | 第51-52页 |
| 4.4.4 LAMP-胶体金双探针系统可行性验证 | 第52页 |
| 4.4.5 LAMP-胶体金双探针系统灵敏度 | 第52-53页 |
| 4.4.6 海豚链球菌分离株的检测验证 | 第53页 |
| 4.4.7 LAMP-胶体金双探针系统特异性 | 第53-54页 |
| 4.4.8 其他方法检测限比较 | 第54页 |
| 4.4.9 斑马鱼组织的检测 | 第54-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-57页 |
| 4.6 结论 | 第57-58页 |
| 第5章 结论、创新点与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.1.1 海豚链球菌单抗制备 | 第58页 |
| 5.1.2 海豚链球菌试纸条的制备 | 第58页 |
| 5.1.3 LAMP-胶体金双探针法 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58-59页 |
| 5.3 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
