| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 研究意义 | 第10页 |
| 1.2 水稻强弱势籽粒灌浆生理水平及生态学水平上的研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 前人对强弱势籽粒差异灌浆在组织形态学上的研究 | 第10-11页 |
| 1.2.2 前人对强弱势籽粒差异灌浆在生理水平的研究 | 第11-13页 |
| 1.3 在分子生态学水平上对水稻强弱势籽粒灌浆的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 前人对葡萄二磷酸腺苷焦磷酸化酶(AGPase)的研究 | 第14-15页 |
| 1.5 当前蛋白质-蛋白质相互作用的主要技术 | 第15-16页 |
| 1.5.1 免疫共沉淀技术 | 第15页 |
| 1.5.2 GST pull-down技术 | 第15-16页 |
| 1.6 本课题研究内容和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-32页 |
| 2.2.1 干湿交替处理灌浆期水稻 | 第17-18页 |
| 2.2.2 荧光定量PCR验证水稻灌浆动态中的OsAPS2含量 | 第18-20页 |
| 2.2.3 OsAPS2基因的克隆 | 第20-22页 |
| 2.2.4 OsAPS2基因表达载体的构建 | 第22-25页 |
| 2.2.5 APS2融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化 | 第25-26页 |
| 2.2.6 抗APS2蛋白的多克隆抗体的制备 | 第26-29页 |
| 2.2.7 钓取与APS2相互作用的蛋白并进行质谱鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.8 GST pull-down验证GF14F蛋白及GF14E蛋白与APS2互作 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-49页 |
| 3.1 籽粒灌浆动态 | 第32页 |
| 3.2 OsAPS2在mRNA水平上的表达分析 | 第32-34页 |
| 3.3 OsAPS2原核表达载体的构建 | 第34-37页 |
| 3.3.1 OsAPS2基因克隆 | 第34-36页 |
| 3.3.2 pET32a-OsAPS2表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.4 His-APS2在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第37-40页 |
| 3.4.1 His-APS2在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| 3.4.2 His-APS2的大量表达及纯化 | 第38-40页 |
| 3.5 His-APS2多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| 3.5.1 免疫小鼠与测定小鼠血清效价 | 第40-41页 |
| 3.5.2 Western blot验证抗多克隆抗体 | 第41页 |
| 3.6 APS2在蛋白水平上的表达分析 | 第41-43页 |
| 3.7 以免疫共沉淀方法获得APS2互作蛋白 | 第43-46页 |
| 3.8 GF14F、GF14E蛋白与APS2蛋白相互作用的研究 | 第46-49页 |
| 3.8.1 GST pull-down验证GF14F、GF14E蛋白与APS2蛋白互作 | 第46-47页 |
| 3.8.2 OsGF14E, OsGF14F基因qRT-PCR检测 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
