| 英文縮写符号及中英文对照 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 植物MAPK级联途经 | 第14-16页 |
| 1.1.1 MAPKs | 第14-15页 |
| 1.1.2 MAPKKs | 第15页 |
| 1.1.3 MAPKKKs | 第15-16页 |
| 1.2 MAPK级联途径参与激素信号转导 | 第16-18页 |
| 1.3 MAPK级联途径参与胞质分裂 | 第18-19页 |
| 1.4 MAPK级联途径参与植物非生物胁迫响应 | 第19-20页 |
| 1.5 MAPK级联途径参与植物生物胁迫响应 | 第20-22页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 植物材料培养与处理 | 第23-24页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.4 酶与各种生化试剂 | 第24页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第24-26页 |
| 2.1.6 溶液与培养基 | 第26-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-43页 |
| 2.2.1 植物基因组DNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2 植物材料总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第32页 |
| 2.2.4 ZmMKK1基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.2.5 真核表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 2.2.5.1 琼脂糖凝胶回收 | 第33页 |
| 2.2.5.2 连接反应 | 第33页 |
| 2.2.5.3 大肠杆菌Top10感受态的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.5.4 大肠杆菌的转化 | 第34页 |
| 2.2.5.5 大肠杆菌中质粒DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.5.6 表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.5.7 根癌农杆菌感受态的制备 | 第36页 |
| 2.2.5.8 农杆菌转化 | 第36页 |
| 2.2.6 农杆菌介导的烟草转化 | 第36-37页 |
| 2.2.7 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第37页 |
| 2.2.8 基因枪轰击法转化玉米 | 第37-38页 |
| 2.2.8.1 质粒包裹 | 第37页 |
| 2.2.8.2 基因枪轰击 | 第37-38页 |
| 2.2.9 转基因植株的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.9.1 基因组水平的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.9.2 转录水平的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 2.2.11 酵母胁迫耐性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.11.1 酵母转化 | 第39页 |
| 2.2.11.2 酵母胁迫耐性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.12 洋葱表皮瞬时表达定位分析 | 第40页 |
| 2.2.13 生理指标的测定 | 第40-42页 |
| 2.2.13.1 NBT,DAB染色和台盼蓝染色 | 第40页 |
| 2.2.13.2 抗氧化酶活性的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.13.3 叶绿素含量的测定 | 第41页 |
| 2.2.13.4 电解质外渗量和膜脂过氧化程度分析 | 第41-42页 |
| 2.2.13.5 游离脯氨酸和可溶性糖的测定 | 第42页 |
| 2.2.14 植物对病原菌抗性分析 | 第42-43页 |
| 2.2.15 酵母双杂交实验筛选与ZmMKK1互作蛋白 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-71页 |
| 3.1 ZmMKK1的分离和结构特征 | 第43-45页 |
| 3.1.1 ZmMKK1基因的克隆 | 第43页 |
| 3.1.2 ZmMKK1的序列分析 | 第43-45页 |
| 3.2 ZmMKK1蛋白的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 3.3 ZmMKK1在玉米中的表达分析 | 第46-49页 |
| 3.3.1 ZmMKK1组织特异性表达和在逆境胁迫下的表达分析 | 第47页 |
| 3.3.2 ZmMKK1在激素处理下的表达分析 | 第47页 |
| 3.3.3 H_2O_2和Ca~(2+)介导12℃诱导ZmMKKl的表达 | 第47-49页 |
| 3.4 ZmMKK1基因在烟草中的遗传转化 | 第49-50页 |
| 3.4.1 转基因表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.4.2 转基因烟草的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5 ZmMKK1转基因烟草低温抗性增强 | 第50-56页 |
| 3.5.1 过表达ZmMKK1的转基因烟草在低温胁迫下的生长情况 | 第50-52页 |
| 3.5.2 过表达ZmMKK1的转基因烟草在低温胁迫下的生理指标分析 | 第52-53页 |
| 3.5.3 过表达ZmMKK1的转基因烟草在低温胁迫下降低了ROS的积累 | 第53-55页 |
| 3.5.4 过表达ZmMKK1的转基因烟草在低温胁迫下增强了胁迫相关基因的表达 | 第55-56页 |
| 3.6 过表达ZmMKK1的转基因烟草对活体病原菌的抗性增强 | 第56-57页 |
| 3.7 过表达ZmMKK1的转基因烟草对腐殖病原菌的敏感性增加 | 第57-58页 |
| 3.8 ZmMKK1转基因拟南芥的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.9 过表达ZmMKK1转基因拟南芥耐盐性增强 | 第59-61页 |
| 3.10 过表达ZmMKK1转基因拟南芥耐旱性增强 | 第61-63页 |
| 3.11 过表达ZmMKK1转基因拟南芥对ABA的敏感性增加 | 第63-64页 |
| 3.12 在高盐和干旱胁迫下过表达ZmMKK1转基因拟南芥提高了POD和CAT的活性,降低ROS积累及细胞死亡率 | 第64-66页 |
| 3.13 过表达ZmMKK1转基因拟南芥增强了胁迫相关基因的表达 | 第66页 |
| 3.14 ZmMKK1转基因玉米的遗传转化 | 第66-69页 |
| 3.14.1 转基因玉米表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 3.14.2 ZmMKK1转基因玉米植株的鉴定 | 第67-69页 |
| 3.15 ZmMKK1增强了酿酒酵母的抗盐和抗干旱能力 | 第69-70页 |
| 3.16 ZmMKK1与ZmMEKK1互作 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第88页 |
