| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 赤潮概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 赤潮的定义及危害 | 第11页 |
| 1.1.2 赤潮的形成因素 | 第11页 |
| 1.1.3 赤潮的预报及检测 | 第11-12页 |
| 1.2 赤潮藻检测的分子技术 | 第12-17页 |
| 1.2.1 凝集素探针 | 第12-13页 |
| 1.2.2 抗体探针 | 第13-14页 |
| 1.2.3 基因探针 | 第14-17页 |
| 1.3 国内外研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 国内研究进展 | 第17页 |
| 1.3.2 国外研究进展 | 第17-20页 |
| 1.4 本课题研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第21-22页 |
| 第2章 产毒微藻的核糖体大亚基 D1–D2 区的克隆及特异性探针的设计 | 第22-38页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 实验藻种及培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 主要培养基及溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2.5 藻种 LSU 的克隆测序 | 第24-26页 |
| 2.2.6 分类探针的设计 | 第26页 |
| 2.2.7 探针特异性验证 | 第26-28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-37页 |
| 2.3.1 基因组的提取与质量检验 | 第28-29页 |
| 2.3.2 LSU D1–D2 区基因的扩增 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR 产物的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.4 阳性克隆的菌落的 PCR 筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.5 目标序列的 T-A 克隆及测序结果 | 第31-34页 |
| 2.3.6 分类探针的设计 | 第34页 |
| 2.3.7 分类探针的特异性验证 | 第34-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 第3章 膜分类芯片检测技术杂交条件优化 | 第38-50页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 实验藻种及培养 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂及仪器 | 第38页 |
| 3.2.3 制备膜分类芯片 | 第38-39页 |
| 3.2.4 制备生物素标记的 PCR 产物 | 第39页 |
| 3.2.5 紫外交联时间梯度实验 | 第39页 |
| 3.2.6 探针上样量梯度实验 | 第39-40页 |
| 3.2.7 PCR 产物反应浓度梯度实验 | 第40页 |
| 3.2.8 杂交时间梯度实验 | 第40页 |
| 3.2.9 杂交温度梯度实验 | 第40页 |
| 3.2.10 洗膜温度梯度实验 | 第40页 |
| 3.2.11 杂交图片的分析 | 第40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-49页 |
| 3.3.1 紫外交联时间优化结果 | 第40-42页 |
| 3.3.2 探针上样量优化结果 | 第42-43页 |
| 3.3.3 PCR 产物反应浓度优化结果 | 第43-45页 |
| 3.3.4 杂交时间优化结果 | 第45-46页 |
| 3.3.5 杂交温度优化结果 | 第46页 |
| 3.3.6 洗膜温度优化结果 | 第46-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第4章 膜分类芯片检测技术中靶序列的生物素标记方法优化 | 第50-57页 |
| 4.1 前言 | 第50页 |
| 4.2 材料与方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 实验藻种及培养 | 第50页 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 | 第50页 |
| 4.2.3 生物素掺入标记法 | 第50-51页 |
| 4.2.4 生物素引物标记法 | 第51页 |
| 4.2.5 PCR-随机引物扩增标记法 | 第51页 |
| 4.2.6 制备膜分类芯片 | 第51页 |
| 4.2.7 膜分类芯片检测 | 第51-52页 |
| 4.2.8 杂交图片的分析 | 第52页 |
| 4.2.9 成本核算 | 第52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-56页 |
| 4.3.1 3 种生物素标记方法扩增产物电泳图谱 | 第52-53页 |
| 4.3.2 3 种生物素标记方法扩增产物掺入效果检测 | 第53-54页 |
| 4.3.3 3 种生物素标记方法 PCR 产物的定量 | 第54页 |
| 4.3.4 3 种生物素标记方法的膜分类芯片检测 | 第54-55页 |
| 4.3.5 3 种生物素标记方法的成本核算 | 第55-56页 |
| 4.4 小结 | 第56-57页 |
| 第5章 膜分类芯片检测技术的靶细胞处理方法优化 | 第57-65页 |
| 5.1 前言 | 第57页 |
| 5.2 材料与方法 | 第57-59页 |
| 5.2.1 实验藻种及培养 | 第57页 |
| 5.2.2 实验试剂及仪器 | 第57页 |
| 5.2.3 产毒微藻的计数及梯度设计 | 第57-58页 |
| 5.2.4 3 种细胞微藻基因组提取方法 | 第58页 |
| 5.2.5 靶核酸的 PCR 扩增和标记 | 第58-59页 |
| 5.2.6 膜分类芯片的制备 | 第59页 |
| 5.2.7 膜分类芯片检测 | 第59页 |
| 5.2.8 杂交图片的分析 | 第59页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 5.3.1 微藻细胞计数 | 第59页 |
| 5.3.2 LSU D1–D2 区的 PCR 扩增和标记 | 第59-61页 |
| 5.3.3 裂解缓冲液法的膜分类芯片检测 | 第61-62页 |
| 5.3.4 一管式植物 DNA 提取试剂盒法的膜分类芯片检测 | 第62-63页 |
| 5.3.5 CTAB 抽提法的膜分类芯片检测 | 第63-64页 |
| 5.4 小结 | 第64-65页 |
| 第6章 非目标基因组的干扰和模拟自然水样实验 | 第65-71页 |
| 6.1 前言 | 第65页 |
| 6.2 材料与方法 | 第65-66页 |
| 6.2.1 实验藻种及培养 | 第65页 |
| 6.2.2 实验试剂及仪器 | 第65页 |
| 6.2.3 非目标基因组干扰实验 | 第65-66页 |
| 6.2.4 模拟自然水样实验 | 第66页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第66-70页 |
| 6.3.1 非目标基因组干扰实验 | 第66-68页 |
| 6.3.2 模拟自然水样实验 | 第68-70页 |
| 6.4 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
