| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-28页 |
| ·PRRSV生物学特征 | 第14-15页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第15-19页 |
| ·非结构蛋白 | 第16页 |
| ·结构蛋白 | 第16-19页 |
| ·PRRSV遗传变异 | 第19-21页 |
| ·结构蛋白编码区的变异 | 第20-21页 |
| ·非结构蛋白编码区的变异 | 第21页 |
| ·PRRSV免疫学与致病机制的研究进展 | 第21-24页 |
| ·体液免疫反应 | 第21-22页 |
| ·细胞免疫反应 | 第22-23页 |
| ·PRRSV的致病机制 | 第23-24页 |
| ·单克隆技术 | 第24-26页 |
| ·单克隆抗体技术的基本原理 | 第24页 |
| ·单克隆抗体的特点 | 第24-25页 |
| ·单克隆抗体的应用 | 第25页 |
| ·单克隆抗体的未来前景 | 第25-26页 |
| ·PRRSV受体的研究进展 | 第26-27页 |
| ·PRRSV的预防及控制 | 第27-28页 |
| ·研究的目的和意义 | 第28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-52页 |
| ·材料 | 第28-33页 |
| ·病料、细胞及PRRSV毒株 | 第28-29页 |
| ·试验动物 | 第29页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第29页 |
| ·质粒及受体菌 | 第29-31页 |
| ·主要试剂配制 | 第31-33页 |
| ·主要设备及仪器 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-52页 |
| ·病料的处理 | 第33页 |
| ·盲传病毒 | 第33页 |
| ·病毒的大量繁殖 | 第33页 |
| ·病毒的TCID50的测定 | 第33-34页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA） | 第34页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·猪肺巨噬细胞（PAM）的制备 | 第35页 |
| ·细胞的培养及传代 | 第35-36页 |
| ·引物设计及合成 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| ·氯化钙法制备新鲜的E.coli 感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·PCR产物回收及连接 | 第39页 |
| ·重组质粒转化DH5α感受态细胞 | 第39页 |
| ·重组质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒的序列分析鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达重组质粒的构建及鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·SDS-PADE 蛋白质电泳分析 | 第43-44页 |
| ·诱导表达条件的筛选机优化 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第45页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·免疫Balb/c小鼠 | 第47页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立及判定标准 | 第47页 |
| ·间接ELISA 检测小鼠免疫后的抗体水平 | 第47-48页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第48-51页 |
| ·Western blot 分析 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-62页 |
| ·病毒分离结果 | 第52页 |
| ·SD-TA 株TCID50的检测结果 | 第52-53页 |
| ·间接免疫荧光试验结果 | 第53-54页 |
| ·分离毒株SD-TA的IFA结果 | 第53页 |
| ·单克隆抗体6D10 IFA结果 | 第53-54页 |
| ·PCR检测结果 | 第54-56页 |
| ·SD-TA毒株的PCR检测结果 | 第54-55页 |
| ·唾液酸粘附素的PCR扩增结果 | 第55-56页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·重组质粒pET-30a (+)-ORF7 的鉴定结果 | 第56页 |
| ·重组质粒pET-28a-Sn-1~5的鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·序列分析结果 | 第57-58页 |
| ·全基因组序列分析结果 | 第57-58页 |
| ·非结构蛋白Nsp2 序列分析 | 第58页 |
| ·主要结构蛋白基因序列分析 | 第58页 |
| ·重组质粒的表达及纯化 | 第58-60页 |
| ·重组质粒pET-30a (+)-ORF7 的表达及纯化 | 第58-59页 |
| ·重组质粒pET-28a (+)-Sn-1~5的表达及纯化 | 第59-60页 |
| ·间接ELISA方法检测小鼠抗体水平及其效价 | 第60-61页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第61页 |
| ·Western blot 结果 | 第61-62页 |
| ·单克隆抗体6D10 Western blot 结果 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白Sn-1~5 Western blot 结果 | 第62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| ·PRRSV SD-TA 株的分离及克隆测序 | 第62-64页 |
| ·PRRSV N蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备 | 第64-65页 |
| ·唾液酸粘附素的克隆测序、表达及蛋白纯化 | 第65-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录:硕士在读期间发表的论文情况 | 第77页 |
