| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 实验器材及试剂 | 第6-11页 |
| 主要实验器材 | 第6-7页 |
| 实验试剂 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 无脊椎动物先天免疫 | 第11-13页 |
| 1.1.1 物理防御 | 第11-12页 |
| 1.1.2 细胞免疫 | 第12-13页 |
| 1.1.3 体液免疫 | 第13页 |
| 1.2 凝集素简介 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物凝集素 | 第14-15页 |
| 1.2.2 动物凝集素 | 第15页 |
| 1.2.3 微生物凝集素 | 第15-16页 |
| 1.3 C 型凝集素的简介 | 第16-19页 |
| 1.3.2 C 型凝集素结构域 | 第16-17页 |
| 1.3.3 C 型凝集素分类及作用 | 第17-19页 |
| 1.4 软体动物 C 型凝集素的研究进展 | 第19页 |
| 1.5 本实验的研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 池蝶蚌 C 型凝集素 cDNA 全序列克隆 | 第21-35页 |
| 摘要 | 第21页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 池蝶蚌总 RNA 的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 总 RNA 的 DNase 处理 | 第22-23页 |
| 2.2.3 SMART cDNA 的合成 | 第23页 |
| 2.2.4 PCR 引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.2.5 池蝶蚌 C 型凝集素 cDNA 序列的克隆 | 第24页 |
| 2.2.6 目的片段的回收、克隆和测序 | 第24-27页 |
| 2.2.7 池蝶蚌 C 型凝集素序列拼接及分析 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-33页 |
| 2.3.1 池蝶蚌肝胰腺总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.3.2 中间片段和 RACE 产物的鉴定 | 第28页 |
| 2.3.3 池蝶蚌 C 型凝集素 cDNA 全长序列分析 | 第28-30页 |
| 2.3.4 池蝶蚌 C 型凝集素氨基酸的序列特征 | 第30-31页 |
| 2.3.5 池蝶蚌 C 型凝集素的蛋白结构域分析 | 第31页 |
| 2.3.6 蛋白质二级结构预测 | 第31-32页 |
| 2.3.7 池蝶蚌 C 型凝集素基因同源性分析 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 池蝶蚌 C 型凝集素组织表达和 LPS 刺激后的特异性表达 | 第35-47页 |
| 摘要 | 第35页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.2.1 池蝶蚌不同组织 C 型凝集素基因的表达 | 第35-37页 |
| 3.2.2 LPS 刺激下池蝶蚌 C 型凝集素的特异性表达 | 第37-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-45页 |
| 3.3.1 总 RNA 的提取 | 第38页 |
| 3.3.2 反转录后模板检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3 池蝶蚌不同组织 C 型凝集素的表达情况 | 第39-40页 |
| 3.3.4 LPS 刺激后池蝶蚌肝胰腺组织中 C 型凝集素的表达情况 | 第40-42页 |
| 3.3.5 LPS 刺激后池蝶蚌性腺组织中 C 型凝集素的表达情况 | 第42-44页 |
| 3.3.6 LPS 刺激后池蝶蚌血淋巴中 C 型凝集素的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 池蝶蚌 C 型凝集素基因的原核表达与纯化 | 第47-58页 |
| 摘要 | 第47页 |
| 4.1 实验方法 | 第47-52页 |
| 4.1.1 表达引物设计 | 第47页 |
| 4.1.2 表达质粒 pGEX-4T-1 的提取 | 第47-48页 |
| 4.1.3 质粒 pGEX-4T-1 和目的片段双酶切 | 第48-50页 |
| 4.1.4 双酶切回收产物连接 | 第50页 |
| 4.1.5 重组质粒的转化 | 第50页 |
| 4.1.6 重组蛋白的原核表达 | 第50-51页 |
| 4.1.7 包涵体复性及蛋白纯化 | 第51-52页 |
| 4.2 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.2.1 目的片段的扩增 | 第52-53页 |
| 4.2.2 目的片段和载体双酶切 | 第53-54页 |
| 4.2.3 C 型凝集素的重组表达 | 第54页 |
| 4.2.4 重组蛋白的溶解性分析 | 第54-55页 |
| 4.2.5 蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第66页 |
