| 缩略词 | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 植物来源天然产物的获取方式 | 第10-12页 |
| 1.1.1 植物中直接提取分离 | 第10-11页 |
| 1.1.2 化学合成方法 | 第11页 |
| 1.1.3 生物技术方法 | 第11页 |
| 1.1.4 合成生物学技术是一种新的方法 | 第11-12页 |
| 1.2 OSW-1的化学全合成 | 第12-13页 |
| 1.3 OSW-1的构效关系小结 | 第13-14页 |
| 1.4 参与OSW-1生物合成的基因 | 第14-15页 |
| 1.5 对甲氧基苯甲酰基的生物合成途径 | 第15-16页 |
| 1.6 PAL的研究现状概述 | 第16-18页 |
| 1.6.1 分布及生理作用 | 第16页 |
| 1.6.2 作用机制及某些重要作用位点 | 第16-17页 |
| 1.6.3 PAL在医药领域的应用 | 第17-18页 |
| 1.7 虎眼万年青中PAL克隆鉴定的意义 | 第18-19页 |
| 第二章 实验所用材料及涉及的一些常规方法 | 第19-27页 |
| 2.1 主要仪器设备及生产厂商 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.2.1 标准品及常用生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.2 常见溶液配方 | 第20-22页 |
| 2.2.3 抗生素配制 | 第22页 |
| 2.2.4 试剂盒及酶等生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.5 菌株及质粒 | 第23页 |
| 2.2.6 植物材料 | 第23页 |
| 2.3 常用实验方法 | 第23-27页 |
| 2.3.1 感受态细胞制作(CaCl_2法) | 第23-24页 |
| 2.3.2 克隆载体连接 | 第24页 |
| 2.3.3 大肠杆菌的转化 | 第24页 |
| 2.3.4 重组子的筛选 | 第24-25页 |
| 2.3.5 重组蛋白的诱导 | 第25页 |
| 2.3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第25页 |
| 2.3.7 蛋白染色—银染法 | 第25-26页 |
| 2.3.8 Western-blot方法 | 第26-27页 |
| 第三章 虎眼万年青中PAL的生物信息学分析 | 第27-33页 |
| 引言 | 第27页 |
| 3.1 实验方法 | 第27-29页 |
| 3.2 实验结果 | 第29-32页 |
| 3.3 本章小结 | 第32-33页 |
| 第四章 野生型PAL重组蛋白的表达和功能分析 | 第33-48页 |
| 引言 | 第33页 |
| 4.1 实验方法 | 第33-38页 |
| 4.1.1 重组蛋白的表达和检测 | 第33页 |
| 4.1.2 蛋白纯化、透析及冷干 | 第33-34页 |
| 4.1.3 野生型蛋白催化及催化产物分析 | 第34-36页 |
| 4.1.4 野生型蛋白催化的最适pH与最适温度分析 | 第36页 |
| 4.1.5 野生型蛋白催化L-Phe、L-Tyr的动力学参数测定 | 第36-38页 |
| 4.2 实验结果 | 第38-46页 |
| 4.2.1 重组蛋白的检测 | 第38-39页 |
| 4.2.2 重组蛋白催化产物的鉴定 | 第39-42页 |
| 4.2.3 重组蛋白催化反应的最适pH及最适温度 | 第42-44页 |
| 4.2.4 野生型重组蛋白催化不同底物的动力学参数测定 | 第44-46页 |
| 4.3 本章小结 | 第46-48页 |
| 第五章 对OsaPAL2和OsaPAL62的定点突变研究 | 第48-62页 |
| 引言 | 第48页 |
| 5.1 实验方法 | 第48-51页 |
| 5.1.1 定点突变方法 | 第48-49页 |
| 5.1.2 对PAL中活性作用位点附近保守区域的定点突变 | 第49-50页 |
| 5.1.3 底物选择性位点的突变 | 第50页 |
| 5.1.4 突变体表达及纯化 | 第50页 |
| 5.1.5 突变体活性比较 | 第50-51页 |
| 5.2 实验结果 | 第51-60页 |
| 5.2.1 PAL局部序列多重比对结果以及突变位点的选择 | 第51-52页 |
| 5.2.2 OsaPAL2和OsaPAL62活性位点旁突变位点的选择 | 第52-53页 |
| 5.2.3 OsaPAL2和OsaPAL62底物选择性位点突变 | 第53页 |
| 5.2.4 HPLC比较突变体活性 | 第53-56页 |
| 5.2.5 突变对酶催化特性影响的动力学分析 | 第56-60页 |
| 5.3 本章小结 | 第60-62页 |
| 第六章 全文总结 | 第62-65页 |
| 6.1 主要内容与意义 | 第62-63页 |
| 1、虎眼万年青中PAL野生型重组蛋白的表达鉴定 | 第62页 |
| 2、突变底物选择性位点提高对L-Tyr的催化能力 | 第62-63页 |
| 3、近活性位点保守区三个位点的突变研究 | 第63页 |
| 6.2 论文创新点 | 第63-64页 |
| 6.3 工作展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 附录 | 第72-102页 |
| 附表 | 第72-84页 |
| 附图 | 第84-102页 |
| 致谢 | 第102-105页 |
| 个人简历、硕士期间专利和论文 | 第105-106页 |
