| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 枯草芽孢杆菌概述 | 第14-17页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌的基本特征 | 第14页 |
| 1.2 枯草芽孢杆菌遗传学及分子生物研究背景 | 第14-15页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌在大熊猫上的应用 | 第15-17页 |
| 2 Hfq蛋白概述 | 第17-20页 |
| 2.1 Hfq蛋白的主要特征 | 第17页 |
| 2.2 Hfq蛋白参与生理调控的分子机制 | 第17-18页 |
| 2.3 Hfq蛋白参与细菌多种生理功能 | 第18-20页 |
| 2.3.1 Hfq蛋白参与细菌的生长及胁迫抗性 | 第18-19页 |
| 2.3.2 Hfq蛋白影响细菌的致病性 | 第19页 |
| 2.3.3 Hfq蛋白影响细菌的群体感应 | 第19-20页 |
| 3 同源重组技术构建基因缺失株 | 第20-24页 |
| 3.1 同源重组技术简介 | 第21页 |
| 3.2 同源重组构建缺失株的一般操作步骤 | 第21-24页 |
| 3.2.1 整合型质粒的选择 | 第22-23页 |
| 3.2.2 感受态细胞转化方法研究 | 第23-24页 |
| 4 研究的目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 B.subtilis HH2 hfq基因缺失株的构建 | 第26-42页 |
| 1 材料 | 第26-30页 |
| 1.1 菌株 | 第26页 |
| 1.2 质粒 | 第26-27页 |
| 1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.4 主要仪器 | 第28页 |
| 1.5 引物 | 第28-29页 |
| 1.6 培养基 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-34页 |
| 2.1 细菌的复苏与扩大培养 | 第30页 |
| 2.2 DNA的提取与检验 | 第30页 |
| 2.3 hfq基因同源序列的PCR扩增与回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.4 TA克隆 | 第31-32页 |
| 2.5 敲除载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.6 枯草芽孢杆菌感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.7 枯草芽孢杆菌感受态细胞的转化与筛选 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.1 B.subtilis HH2 DNA的提取与检验 | 第34-35页 |
| 3.2 hfq基因同源序列PCR扩增与回收纯化 | 第35-37页 |
| 3.3 敲除载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.4 缺失株的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 缺失株的测序验证 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 B.subtilis HH2△hfq相关表型及基因表达量的变化 | 第42-57页 |
| 1 材料 | 第42-44页 |
| 1.1 菌株 | 第42-43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 试验仪器 | 第43页 |
| 1.4 引物 | 第43-44页 |
| 1.5 培养基 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-47页 |
| 2.1 HH2和HH2△hfq生长曲线测绘 | 第44-45页 |
| 2.2 HH2和HH2△hfq纤维素分解能力测定 | 第45页 |
| 2.2.1 刚果红纤维素平板分解试验 | 第45页 |
| 2.2.2 滤纸崩解试验 | 第45页 |
| 2.3 荧光定量PCR检测HH2和HH2△hfq内切葡聚糖酶Cel042基因的表达量 | 第45-47页 |
| 2.3.1 RNA提取 | 第46页 |
| 2.3.2 体外反转录 | 第46-47页 |
| 2.3.3 qRT-PCR | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-55页 |
| 3.1 HH2和HH2△hfq生长曲线绘制 | 第47-48页 |
| 3.2 HH2和HH2△hfq纤维素分解能力测定 | 第48-49页 |
| 3.2.1 刚果红纤维素分解试验 | 第48-49页 |
| 3.2.2 滤纸崩解试验 | 第49页 |
| 3.3 荧光定量PCR检测HH2和HH2△hfq内切葡聚糖酶Cel042基因的表达量 | 第49-55页 |
| 3.3.1 RNA提取及cDNA的电泳验证 | 第49-50页 |
| 3.3.2 各个引物的熔点曲线 | 第50-52页 |
| 3.3.3 各个基因荧光定量PCR扩增曲线 | 第52-54页 |
| 3.3.4 Cel042基因mRNA表达水平 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 5 本章小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67页 |
