| 中文摘要 | 第14-17页 |
| ABSTRACT | 第17-20页 |
| 符号说明 | 第21-23页 |
| 前言 | 第23-38页 |
| 1 大蒜及其硫化物 | 第23-27页 |
| 1.1 大蒜硫化物的产生机理 | 第23-24页 |
| 1.2 大蒜硫化物的药理作用研究概况 | 第24-27页 |
| 1.2.1 抗菌作用 | 第24-25页 |
| 1.2.2 对心血管系统作用 | 第25页 |
| 1.2.3 抗肿瘤作用 | 第25-26页 |
| 1.2.4 对免疫系统的调节作用 | 第26页 |
| 1.2.5 其他作用 | 第26-27页 |
| 2 肺癌的研究现状 | 第27-29页 |
| 2.1 肺癌的流行病学研究 | 第27页 |
| 2.2 肺癌的高危因素 | 第27-28页 |
| 2.3 肺癌的组织学分类 | 第28页 |
| 2.4 肺癌的治疗 | 第28-29页 |
| 3 细胞凋亡 | 第29-32页 |
| 3.1 细胞凋亡概述 | 第29页 |
| 3.2 细胞凋亡的特征 | 第29-30页 |
| 3.3 细胞凋亡的信号通路 | 第30-32页 |
| 3.3.1 死亡受体通路 | 第30-31页 |
| 3.3.2 线粒体通路 | 第31-32页 |
| 3.3.3 内质网通路 | 第32页 |
| 4 细胞周期 | 第32-35页 |
| 4.1 细胞周期概述 | 第32-33页 |
| 4.2 Cyclins | 第33-34页 |
| 4.3 细胞周期失控与肿瘤 | 第34-35页 |
| 5 本论文的研究背景,研究内容与创新性 | 第35-38页 |
| 第一章 DADS,AMDS及DAS在不同温度下稳定性研究 | 第38-54页 |
| 1 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第38页 |
| 1.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.1 三种化合物中杂质的检查与鉴定 | 第39页 |
| 2.1.1 GC-MS条件 | 第39页 |
| 2.1.2 溶液配制 | 第39页 |
| 2.1.3 杂质检查与鉴定 | 第39页 |
| 2.2 HPLC法测定三种化合物含量 | 第39-41页 |
| 2.2.1 色谱条件 | 第39-40页 |
| 2.2.2 溶液配制 | 第40页 |
| 2.2.3 方法学验证 | 第40-41页 |
| 2.2.3.1 系统适应性试验 | 第40页 |
| 2.2.3.2 专属性 | 第40页 |
| 2.2.3.3 线性范围 | 第40页 |
| 2.2.3.4 检测限 | 第40-41页 |
| 2.2.3.5 定量限 | 第41页 |
| 2.2.3.6 精密度 | 第41页 |
| 2.2.3.7 样品稳定性 | 第41页 |
| 2.3 DADS,AMDS及DAS稳定性考察 | 第41-42页 |
| 2.3.1 25℃条件下的稳定性 | 第41页 |
| 2.3.2 4℃条件下的稳定性 | 第41-42页 |
| 2.3.3 -20℃条件下的稳定性 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-52页 |
| 3.1 三种化合物中杂质的检查与鉴定 | 第42-44页 |
| 3.2 HPLC法测定三种化合物含量 | 第44-48页 |
| 3.2.1 系统适应性试验 | 第44页 |
| 3.2.2 专属性 | 第44-45页 |
| 3.2.3 线性范围 | 第45-46页 |
| 3.2.4 检测限与定量限 | 第46-47页 |
| 3.2.5 精密度 | 第47页 |
| 3.2.6 样品稳定性 | 第47-48页 |
| 3.3 DADS,AMDS及DAS在25℃、4℃及-20℃条件下三个月内稳定性 | 第48-52页 |
| 3.3.1 25℃条件下的稳定性 | 第48-50页 |
| 3.3.2 4℃条件下的稳定性 | 第50-51页 |
| 3.3.3 -20℃条件下的稳定性 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 第二章 DADS,AMDS及DAS的抗肿瘤活性研究 | 第54-62页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第54页 |
| 1.2 细胞株 | 第54-55页 |
| 1.3 实验仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| 2.1 细胞培养 | 第55-56页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第55页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第55页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第55-56页 |
| 2.1.4 细胞计数 | 第56页 |
| 2.2 DADS,AMDS及DAS对H460细胞抑制率的测定 | 第56-57页 |
| 2.3 DADS,AMDS及DAS作用下H460的细胞形态观察 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-59页 |
| 3.1 DADS,AMDS及DAS对H460细胞抑制率的测定 | 第57-58页 |
| 3.2 DADS,AMDS及DAS作用下H460的细胞形态观察 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 DADS,AMDS及DAS诱导H460细胞凋亡的机制研究 | 第62-85页 |
| 1 实验材料 | 第62-67页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第62-64页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第64-66页 |
| 1.3 实验仪器 | 第66-67页 |
| 2 实验方法 | 第67-74页 |
| 2.1 碘化丙啶染色观察死细胞 | 第67页 |
| 2.2 DAPI染色观察凋亡小体 | 第67页 |
| 2.3 FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡试验 | 第67-68页 |
| 2.4 Elisa试剂盒法检测caspase 3、caspase 8及caspase 9的表达 | 第68-69页 |
| 2.4.1 Bradford法测定蛋白浓度 | 第68-69页 |
| 2.4.2 制备pNA标准曲线 | 第69页 |
| 2.4.3 caspase 3、caspase 8及caspase 9活性检测 | 第69页 |
| 2.5 流式细胞仪检测细胞膜电位变化 | 第69-70页 |
| 2.6 流式细胞仪检测细胞内反应活性氧水平 | 第70页 |
| 2.7 Western-blotting检测凋亡相关蛋白表达 | 第70-72页 |
| 2.7.1 细胞蛋白样品的提取 | 第70-71页 |
| 2.7.2 蛋白浓度测定 | 第71页 |
| 2.7.3 Western blotting | 第71-72页 |
| 2.8 RT-PCR检测凋亡相关基因表达 | 第72-74页 |
| 2.8.1 RNA提取 | 第72-73页 |
| 2.8.2 逆转录合成cDNA | 第73页 |
| 2.8.3 半定量PCR反应 | 第73-74页 |
| 2.8.4 PCR扩增产物半定量分析 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-82页 |
| 3.1 碘化丙啶染色观察死细胞 | 第74-75页 |
| 3.2 DAPI染色观察凋亡小体 | 第75-76页 |
| 3.3 FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡试验 | 第76-77页 |
| 3.4 Ellisa试剂盒法检测caspase3、caspase8及caspase9的表达 | 第77-79页 |
| 3.5 流式细胞仪检测细胞膜电位变化 | 第79页 |
| 3.6 流式细胞仪检测细胞内ROS的变化 | 第79-80页 |
| 3.7 Western-blotting检测凋亡相关蛋白表达 | 第80-82页 |
| 3.8 RT-PCR检测凋亡相关基因表达 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| 5 小结 | 第84-85页 |
| 第四章 DADS,AMDS,DAS对肺癌细胞H460的细胞周期阻滞作用及细胞迁移实验 | 第85-94页 |
| 1 实验材料 | 第85-86页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第85-86页 |
| 1.2 实验仪器 | 第86页 |
| 2 实验方法 | 第86-87页 |
| 2.1 流式细胞仪检测细胞周期阻滞作用 | 第86-87页 |
| 2.2 细胞划痕实验 | 第87页 |
| 2.3 Western blotting检测细胞周期及细胞迁移调控蛋白 | 第87页 |
| 2.4 RT-PCR检测周期阻滞及细胞迁移相关基因表达 | 第87页 |
| 3 结果 | 第87-92页 |
| 3.1 流式细胞仪检测细胞周期阻滞作用 | 第87-89页 |
| 3.2 细胞划痕实验 | 第89-90页 |
| 3.3 Western blotting检测细胞周期及细胞迁移调控蛋白 | 第90-91页 |
| 3.4 RT-PCR检测周期阻滞及细胞迁移相关基因表达 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-93页 |
| 5 小结 | 第93-94页 |
| 全文总结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第101-102页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第102页 |
