| 符号说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 NDV 的一般生物学特性 | 第14-17页 |
| 1.1.1 NDV 的分类与结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 抵抗力 | 第15页 |
| 1.1.3 NDV 的培养特性 | 第15页 |
| 1.1.4 NDV 生物学活性 | 第15-16页 |
| 1.1.4.1 血凝性 | 第15-16页 |
| 1.1.4.2 神经氨酸酶活性 | 第16页 |
| 1.1.4.3 细胞融合与溶血活性 | 第16页 |
| 1.1.4.4 其他活性 | 第16页 |
| 1.1.5 NDV 的毒力及致病性 | 第16-17页 |
| 1.2 NDV 的基因组与结构蛋白特性 | 第17-23页 |
| 1.2.1 NDV 的基因组结构 | 第17页 |
| 1.2.2 NDV 的结构蛋白特征 | 第17-23页 |
| 1.2.2.1 NP 蛋白 | 第18页 |
| 1.2.2.2 P 蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.2.3 M 蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.2.4 F 蛋白 | 第20-22页 |
| 1.2.2.5 F 蛋白与 HN、M 蛋白的协同致病作用 | 第22-23页 |
| 1.3 NDV 的分子流行病学 | 第23-24页 |
| 1.4 NDV 在水禽中的分子流行病学 | 第24-25页 |
| 1.4.1 NDV 宿主范围的扩大 | 第25页 |
| 1.5 NDV 的诊断 | 第25-28页 |
| 1.5.1 病毒分离与鉴定 | 第25-26页 |
| 1.5.2 血清学诊断技术 | 第26页 |
| 1.5.2.1 血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI） | 第26页 |
| 1.5.2.2 琼脂凝胶扩散试验 | 第26页 |
| 1.5.2.3 乳胶凝集试验 | 第26页 |
| 1.5.2.4 酶联免疫吸附试验 | 第26页 |
| 1.5.3 分子生物学诊断技术 | 第26-27页 |
| 1.5.3.1 RT-PCR 技术 | 第26-27页 |
| 1.5.3.2 核酸探针技术 | 第27页 |
| 1.5.3.3 RNA 指纹图谱 | 第27页 |
| 1.5.4 免疫组化染色技术 | 第27-28页 |
| 1.6 实时荧光定量 RT-PCR 检测方法 | 第28-32页 |
| 1.6.1 实时荧光定量的方法及工作原理 | 第28-31页 |
| 1.6.1.1 非特异性荧光定量 PCR——染料法（以 SYBR Green 为介绍） | 第28-30页 |
| 1.6.1.2 特异性荧光定量 PCR——探针法 | 第30页 |
| 1.6.1.3 分子信标（Beacon）法 | 第30-31页 |
| 1.6.1.4 双杂交（FRET）探针法 | 第31页 |
| 1.6.2 实时荧光定量 PCR 的定量方法 | 第31页 |
| 1.6.3 实时荧光定量 RT-PCR 在 NDV 检测中的应用 | 第31-32页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-46页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 病毒 | 第34页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第34页 |
| 2.1.3 仪器和试剂 | 第34-35页 |
| 2.2 方法 | 第35-46页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第35-36页 |
| 2.2.2 人工攻毒试验 | 第36-37页 |
| 2.2.2.1 病毒的增殖 | 第36页 |
| 2.2.2.2 攻毒试验 | 第36-37页 |
| 2.2.3 血液生化指标及细胞因子的检测 | 第37页 |
| 2.2.4 病理组织学观察 | 第37-38页 |
| 2.2.4.1 石蜡切片制作方法 | 第37页 |
| 2.2.4.2 HE 染色步骤 | 第37-38页 |
| 2.2.5 免疫组化染色 | 第38页 |
| 2.2.5.1 玻片处理 | 第38页 |
| 2.2.5.2 组织包埋及切片 | 第38页 |
| 2.2.5.3 免疫组化染色具体步骤 | 第38页 |
| 2.2.6 SYBR GreenⅠ荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第38-44页 |
| 2.2.6.1 NDV F 基因和β-actin 引物设计 | 第38-39页 |
| 2.2.6.2 病料组织中总 RNA 的提取 | 第39页 |
| 2.2.6.3 目的基因 PCR 产物的扩增及克隆测序 | 第39-42页 |
| 2.2.6.3.1 NDV F 基因与β-actin 的提取 | 第39页 |
| 2.2.6.3.2 RT-PCR 反应 | 第39-40页 |
| 2.2.6.3.3 目的片段的纯化回收 | 第40-41页 |
| 2.2.6.3.4 PCR 产物与 pMD18-T Vector 载体连接 | 第41页 |
| 2.2.6.3.5 用 CaCl2制备大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第41-42页 |
| 2.2.6.3.6 转化 | 第42页 |
| 2.2.6.4 质粒 DNA 的提取 | 第42-43页 |
| 2.2.6.5 荧光定量 RT-PCR 反应条件的优化 | 第43-44页 |
| 2.2.6.5.1 引物最佳浓度的优化 | 第43页 |
| 2.2.6.5.2 最适退火温度的优化 | 第43-44页 |
| 2.2.6.6 荧光定量 RT-PCR 标准曲线的建立 | 第44页 |
| 2.2.6.7 荧光定量 RT-PCR 的特异性试验 | 第44页 |
| 2.2.6.8 荧光定量 RT-PCR 的敏感性试验 | 第44页 |
| 2.2.6.9 荧光定量 RT-PCR 的重复性试验 | 第44页 |
| 2.2.7 NDV 在雏鹅各组织中的分布情况 | 第44-46页 |
| 2.2.7.1 各组织总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.7.2 病料中 NDV 的荧光定量检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-65页 |
| 3.1 人工攻毒试验结果 | 第46-55页 |
| 3.1.1 人工感染鹅的临床症状 | 第46-47页 |
| 3.1.2 人工感染鹅的剖检变化 | 第47-49页 |
| 3.1.3 血液生化及细胞因子检测结果 | 第49-51页 |
| 3.1.4 人工感染鹅的病理组织学变化 | 第51-55页 |
| 3.2 免疫组化染色对人工感染 NDV 发病及死亡鹅各组织器官的检测结果 | 第55-56页 |
| 3.3 NDV 荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第56-62页 |
| 3.3.1 重组质粒的 PCR 鉴定及其测序鉴定结果 | 第56-57页 |
| 3.3.2 荧光定量 RT-PCR 反应条件的优化结果 | 第57页 |
| 3.3.3 荧光定量 RT-PCR 标准曲线的建立 | 第57-58页 |
| 3.3.4 特异性试验结果 | 第58-59页 |
| 3.3.5 敏感性试验结果 | 第59-61页 |
| 3.3.6 重复性试验结果 | 第61-62页 |
| 3.4 NDV 在雏鹅各组织中的分布情况 | 第62-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第80页 |
